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谷丙转氨酶的测定

发布日期:2019/10/8 8:48:14

背景及概述[1]

谷丙转氨酶全称“谷氨酸丙酮酸转氨酶”。其作用为催化谷氨酸与丙酮酸之间可逆转移氨基而形成α-酮戊二酸与丙氨酸,以磷酸吡哆醛为辅酶,维持细胞中氨基酸代谢。谷丙转氨酶(GPT)在肝脏、心肌等组织细胞损伤时释放入血中,临床上通过测定血中GPT的活力来了解有关脏器病变的性质和程度。由于肝脏中所含的GPT约为心脏、肌肉、肾组织的三倍多,所以血清中GPT明显升高几乎总是由肝病引起的。

一般在毒物或药物引起的中毒性肝损害时GPT呈显著增高;各型病毒性肝炎活动期GPT明显增高;其他肝脏疾病、胆道疾患、胰腺炎、心肌病变等均可有GPT的升高。另外某些生理条件的变化亦可引起GPT升高,如剧烈体育活动或妊娠期可有轻度GPT一过性升高。谷丙转氨酶的测定,目前临床实验室常采用光电比色(赖氏)法,正常参考值为40单位以下。

相关研究[2-4]

1)血清谷丙转氨酶(ALT)与代谢综合征(MS)及其组分之间的关系。采样分层整群抽样方法对在江苏省常州市武进区抽取的8818名居民进行问卷调查、体格检查和实验室检测。结论是血清ALT水平与MS及其组分相关,血清ALT水平可能成为MS患病的一个预测指标。

2)急性有机磷中毒病人病情严重程度与谷丙转氨酶的相关性。检测42例急性有机磷中毒病人的谷丙转氨酶,分析其检测值与病情相关性。结果:急性有机磷中毒患者中,伴有谷丙转氨酶升高,而且升高程度与病情严重程度呈正相关,严重病例谷丙转氨酶检测值明显高于一般患者,谷丙转氨酶差异有统计学意义P<0.05。结论:急性有机磷中毒病人谷丙转氨酶升高值是判断病情严重的指标之一。

3)血清谷丙转氨酶(ALT)水平与肝脏病理改变的关系。对651例病理确诊的各型肝炎患者,按肝穿时ALT水平高低,用SPSS80软件分析。结果 各型肝炎血清ALT水平依次为急性肝炎(AH)>慢性肝炎(CH)中>CH重>CH轻>活动性肝硬变(ALC)>静止性肝硬变(SLC);ALT正常组86例中,105%肝组织正常;仅中度ALT异常的CH组血清ALT与肝病理损害程度弱相关(r=0189,P=0006)。结论是血清ALT水平与肝脏病理改变程度无明确相关性。

测定方法[5]

基于铜纳米簇荧光探针定量检测溶液中谷丙转氨酶的方法,它以谷胱甘肽为保护剂的铜纳米簇作为荧光探针,通过荧光“off-on”模式特异性检测溶液中谷丙转氨酶含量,其特征在于按如下的步骤进行:

(1)硫普罗宁母液配置:称取0.1000g硫普罗宁溶于5mL高纯水中;将母液稀释之浓度为1mg/mL的低浓度,低温保存待用;

(2)分别配置浓度为1,5,50,100,500,1000U/L的谷丙转氨酶溶液,低温保存待用;

(3)将制备好的基于谷胱甘肽为稳定剂的铜纳米簇均匀分散到高纯水中,配制成浓度为0.675mM,体积为4mL的检测体系,并利用荧光分光光度计测定此时的荧光强度,在激发波长354nm的激发下,该荧光探针在632nm处表现出较强发射;

(4)将1.2mL铜纳米簇均匀分散到2.6mL高纯水中,混合均匀后,向混合溶液中加入0.1mL1mg/mL的硫普罗宁溶液,加高纯水0.1mL,待硫普罗宁与铜纳米簇溶液充分作用后测试体系的荧光强度,此时的荧光强度发生明显猝灭,故硫普罗宁可作为该检测体系的猝灭剂;

(5)向离心管中加入2.6mL高纯水中,1.2mL铜纳米簇溶液,混合均匀后,向混合溶液中加入0.1mL1mg/mL的硫普罗宁溶液,充分反应后再加入0.1mL谷丙转氨酶溶液,硫普罗宁与谷丙转氨酶充分作用,使得荧光强度恢复并检测其荧光发射光谱,通过与(4)中荧光强度对比,可以利用荧光发射光谱强度的恢复值证明该铜纳米簇作为荧光探针检测谷丙转氨酶的可行性;

(6)检测溶液中谷丙转氨酶的含量线性的测定

向离心管中分别加入0.2~3.4mL高纯水,0.4~3.6mL铜纳米簇溶液,0.1mL硫普罗宁溶液,向混合溶液中分别加入0.1mL不同浓度1~1000U/L的谷丙转氨酶溶液,充分反应1~15min,分别用荧光分光光度计检测加入谷丙转氨酶前后的荧光强度;所述的铜纳米簇是指基于谷胱甘肽为稳定剂的铜纳米簇。实验结果表明,在谷丙转氨酶浓度在1-1000U/L范围内,铜纳米簇的荧光强度恢复值与谷丙转氨酶的浓度呈现线性关系,线性方程为DF=116.90744+0.54101X(DF是加入谷丙转氨酶后的荧光强度与只加入硫普罗宁后铜纳米簇的荧光强度得差值,X是谷丙转氨酶的浓度),线性相关系数为0.992,检出限为0.61U/L。

主要参考资料

[1] 卫生学大辞典

[2] 血清谷丙转氨酶与代谢综合征相关性

[3] 谷丙转氨酶检测对有机磷中毒患者病情判断的意义

[4] 血清谷丙转氨酶水平与肝脏病理改变程度相关性探讨

[5] CN201811035294.6基于铜纳米簇荧光探针定量检测溶液中谷丙转氨酶的方法

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2019-10-08
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