AZD3759盐酸盐的制备方法

背景及概述^[1]

靶向药，AZD3759，是一款专门针对携带EGFR突变、合并脑转移的晚期肺癌患者而开发的“大杀器”。最近一年多来，陆陆续续公布过该药物的动物实验以及小规模非正式临床试验数据。近日，《LancetRespirMed》杂志次正式发布了该药物多中心、I期临床试验数据。从2014年11月到2016年9月，在美国、澳大利亚、韩国以及台湾的11家医院一共招募了67名志愿者，接受了该药物治疗。其中，29名患者入组的是剂量探索队列（也就是分别接受不同浓度的药物，摸索最合适的剂量），另外38名患者入组的是剂量拓展队列（剂量已经在前面的摸索期敲定了，目的是初步验证疗效）。截止到2016年12月12号，依然有23名患者疾病稳定，一直在接受AZD3759的治疗。在剂量探索阶段，500mg每天2次组有两位患者出现了严重的副作用（皮疹和粘膜炎）。因此，研究者判断200mg或者300mg每天2次，是更合适的剂量。200或300mg每天2次，最主要的副作用是皮疹、腹泻、肝功能异常等，一般都可以控制和处理；3级不良反应发生率低于20%，未出现4级不良反应。

制备^[1]

步骤1：5-羟基-4-甲氧基-2-硝基苯甲酸

将4，5-二甲氧基-2-硝基苯甲酸(145g，0.639mol)溶于氢氧化钠溶液(6N，600mL)中并且在100℃下加热3h。将该混合物冷却至室温，并且将其倾倒进浓盐酸和碎冰的混合物(pH＜2)中。将该混合物过滤，并且将滤饼干燥，以给出呈黄色固体的步骤1(149g，粗品)，该物质直接使用无需进一步纯化。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ7.34(s，1H)，6.89(s，1H)，3.80(s，3H)。

步骤2：2-氨基-5-羟基-4-甲氧苯甲酸

在室温下，在H2气氛(50psi)下，将MeOH(1.2L)中的步骤1(50g，93.85mmol)和10％Pd/C(5g)的混合物搅拌4h。将该混合物过滤并且用MeOH(10×1L)洗涤。将合并的MeOH提取物浓缩，以给出呈黑色固体的步骤2(27.7g，64％收率)，该物质直接使用无需进一步纯化。

步骤3：7-甲氧基喹唑啉-4，6-二醇

向在2-甲氧乙醇(2L)中的步骤2(88g，0.48mol)的悬浮液中添加甲脒(101g，0.96mol)并且将该反应混合物回流过夜。将该反应混合物浓缩，用水(1.5L)稀释并用氨水中和(至pH＝7)。将该混合物过滤并且将沉淀物用水洗涤。将沉淀物在减压下干燥，以给出呈棕色固体的步骤3(62g，67％收率)。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ7.89(s，1H)，7.36(s，1H)，7.08(s，1H)，3.88(s，3H)。

步骤4：4-羟基-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸盐

向在无水DCM(1L)中的步骤3(52g，0.27mol)和吡啶(53.6g，0.68mol)的悬液液中滴加乙酰氯(52.9g，0.68mol)并且将该混合物在室温下搅拌过夜。将该混合物倾倒进水(1L)中并且用DCM萃取若干次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，以给出呈黑色固体的步骤4(63.2g，100％收率)。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ8.62(s，1H)，7.88(s，1H)，7.37(s，1H)，3.95(s，3H)，2.74(s，3H)。

步骤5：4-氯-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸盐

将在POCl3(287mL)中的步骤4(75.6g，0.323mol)的悬液液加热至回流、持续0.5h。将该反应混合物浓缩并且用DCM(500mL)稀释，倾倒进水(500mL)中，过滤并且用DCM洗涤。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。通过色谱法(PE/EtOAc＝1/1)纯化，给出呈白色固体的步骤5(55g，67％收率)。1HNMR(CDCl3400MHz)：δ8.95(s，1H)，7.90(s，1H)，7.43(s，1H)，4.02(s，1H)，2.39(s，1H)。

步骤6：4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基乙酸盐

向在乙腈(4L)中的步骤5(100g，0.396mol)的悬浮液中添加2-氟-3-氯苯胺(60.5g，0.416mol)并且将该反应混合物加热至80℃过夜。通过过滤收集沉淀物并且在真空中干燥，以给出呈白色固体的步骤6(181g，80％纯度)，该物质直接用于下一步而无需纯化。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ8.93(s，1H)，8.82(s，1H)，7.67-7.63(m，1H)，7.59(s，1H)，7.56-7.52(m，1H)，7.39-7.35(m，1H)，4.02(s，3H)，2.39(s，3H)。

步骤7：4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-醇

向在MeOH(2L)中的步骤6(181g，0.396mol)的溶液中添加碳酸钾(138g，1mol)并且将该反应混合物在室温下搅拌过夜。将该混合物过滤并且将固体用MeOH洗涤。将滤液在真空中浓缩，已给出步骤7(280g，60％纯度，含有碳酸钾)。1HNMR(DMSO-d6400MHz)：δ8.01(s，1H)，7.61-7.58(m，1H)，7.27-7.24(m，1H)，7.17-7.13(m，1H)，6.95(s，1H)，6.83(s，1H)，3.79(s，3H)。

步骤8：叔丁基(3R)-4-(氯羰基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸酯

在0℃下，向在无水DCM(250mL)中的三光气(23g，75mmol)的混合物中滴加吡啶(18g，225mmol)，随后添加叔丁基(3R)-3-甲基哌嗪-1-羧酸酯(15g，75mmol)。将该混合物在室温下搅拌过夜。TLC显示起始材料已经被消耗。将该混合物浓缩，以给出呈黄色固体的中间体8，该物质直接使用无需进一步纯化。

步骤9：4-叔丁基1-{4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基}(2R)-2-甲基哌嗪-1，4-二羧酸酯

将在无水DMF(300mL)中的根据以上程序制备的步骤7(19.2g，60mmol)、步骤8和碳酸钾(16.6g，120mmol)的混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物倾倒进水(250mL)中并过滤，并且将滤饼在真空下干燥，以给出呈黄色固体的步骤9(25g，75％收率)。HPLC：在10-80AB_6min色谱中tR＝2.68min(UltimateXB-C18，3.0*50mm，3um)。LCMS：在5-95AB_1.5min色谱中tR＝0.792min(WelchXtimateC18，2.1*30mm，3um)，MS(ESI)m/z546.0[M+H]+。

步骤10：4-[(3-氯-2-氟苯基)氨基]-7-甲氧基喹唑啉-6-基(2R)-2-甲基哌嗪-1-羧酸酯

在室温下，将在DCM(100mL)和HCl/二氧六环(10mL，4M)中的步骤9(8.3g，15mmol)的混合物搅拌30min。在过滤之后，收集固体并且将其再溶解于水中，并且然后用饱和NaHCO3调节至pH＝8。收集沉淀物并且将其用CH2Cl2洗涤。将该固体在真空下干燥，以给出呈黄色固体的步骤10(8g，85％纯度)。该粗产物用于下一步而无需纯化。

步骤11：AZD3759

向在MeOH(100mL)中的步骤10(8g，15mmol，85％纯度)和多聚甲醛(1g，32mmol)的混合物中添加氰基硼氢化钠(2g，32mmol)并且将该反应混合物在室温下搅拌过夜。将该反应混合物在真空中浓缩，将残余物用水稀释并且用EtOAc(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并且在减压下浓缩。通过反相制备型HPLC(柱：synergi77*250，10um，梯度：5-35％B(A＝水/0.05％甲酸，B＝乙腈)，流速：140mL/min)纯化粗产物。用饱和碳酸钾中和被包含在所希望的产物中的部分并且将其用EtOAc萃取。将合并的有机层在真空中浓缩并冻干，以给出呈白色固体的实例1(4g，2个步骤的收率是58％)。

LC-MS：在4min色谱中tR＝1.406min，MS(ESI)m/z460.0[M+H]+SFC：在3min色谱中tR＝1.637min(ChiralpakAD-350*4.6mmI.D，3um)，MS(ESI)m/z460.1[M+H]+

1HNMR(CDCl3400MHz)：δ8.76(s，1H)，8.53-8.48(m，1H)，7.65(s，1H)，7.44(brs，1H)，7.34(s，1H)，7.19-7.15(m，2H)，4.51-4.50(m，1H)，4.20-4.05(m，1H)，3.99(s，3H)，3.50-3.30(m，1H)，2.87(d，1H)，2.73(d，1H)，2.35(s，3H)，2.35-2.25(m，1H)，2.13-2.11(m，1H)，1.47(s，3H)。

步骤12：AZD3759盐酸盐

将步骤1(1.8g)溶解于乙腈(5mL)中，然后缓慢添加1NHCl(5mL)，通过冻干将该溶液干燥，以给出呈黄色固体的实例2(1.93g)。LC-MS：在4min色谱中tR＝1.355min，MS(ESI)m/z460.1[M+H]+。SFC：在3min色谱中tR＝1.773min(ChiralpakAD-350*4.6mmI.D，3um)，MS(ESI)m/z460.1[M+H]+。1HNMR(CD3OD400MHz)：δ8.55(s，1H)，8.33-8.16(m，1H)，7.56(t，1H)，7.45(t，1H)，7.33(s，1H)，7.28-7.20(m，1H)，4.81-4.59(m，1H)，4.52-4.15(m，1H)，4.10-3.95(m，3H)，3.74-3.48(m，3H)，3.35(br.s.，1H)，3.24-3.09(m，1H)，2.97(s，3H)，1.54(br.s.，3H)。[α]D25＝-14.96(c10，DMSO)

主要参考资料

[1]CN201480012092.3表皮生长因子受体的活化突变形式的喹唑啉抑制剂