人骨髓间充质干细胞无血清培养基的应用

背景^[1-3]

人骨髓间充质干细胞无血清培养基适用于人骨髓间充质干细胞各个时期的培养，培养基不含血清可以减少血清对细胞培养发育的干扰。无血清培养基是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。

无血清培养基的基本配方:基本成分为基础培养基及添加组分两大部分。用于生物制药和疫苗生产的细胞在体外培养时，多数呈贴壁生长或兼性贴壁生长；而当其在无血清、无蛋白培养基中生长时，由于缺乏血清中的各种粘附贴壁因子如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原、玻表粘连蛋白，细胞往往以悬浮形式生长。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是存在于骨髓、脂肪、胎盘、结缔组织和器官间质内的一类具有自我更新、增殖和多向分化潜能的成体干细胞，可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝实质细胞、肌细胞以及神经元细胞等，已成为基础医学、临床医学、再生医学、组织工程等研究领域的重要种子细胞之一，具有十分诱人的应用前景。

无血清培养基的优点

1.可避免血清批次间的质量变动，提高细胞培养和实验结果的重复性。

2.避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。

3.避免血清组分对实验研究的影响。

4.有利于体外培养细胞的分化。

5.可提高产品的表达水平并使细胞产品易于纯化。

缺点：

1.细胞在无血清培养基中易受某些机械因素和化学因素的影响，培养基的保存和应用不如传统的合成培养基方便。

2.成本较高。

3.针对性很强，一种无血清培养基仅适合某一类细胞的培养。

应用^[4][5]

用于人骨髓间充质干细胞对间质性肺纤维化的抗损伤治疗机制及黄酮化合物的协同效应研究

通过体外诱导的NKT细胞,模拟间质性肺纤维化炎症损伤特点,探讨了骨髓间充质干细胞的免疫调节抗炎及其保护肺上皮细胞的抗损伤机制,调查了骨髓间充质干细胞对NSIP患者异常的肺成纤维细胞的影响,同时探索了中药经验方中总黄酮提取物可能的协同效应,为临床间质肺纤维化的治疗开拓新的思路和途径。研究方法

人骨髓间充质干细胞的培养鉴定与在小鼠肺内的定殖全骨髓培养法分离人2～3月龄流产胎儿骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells BMMSCs),并进行细胞表型鉴定。

调整合适的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)培养密度,转染(green fluorescent protein,GFP)绿色荧光蛋白真核表达质粒-PEGFPn2。取转染GFP质粒表达绿色荧光蛋白的间充质干细胞(1×106/只)经尾静脉注入SCID小鼠体内,MSCs注入小鼠体内24小时内处死小鼠,冰冻切片,共聚焦激光显微镜下观察。

参考文献

[1]Identification of a bone marrow-derived epithelial-like population capable of repopulating injured mouse airway epithelium[J].Wong,Amy P,Keating,Armand,Lu,Wei-Yang,Duchesneau,Pascal,Wang,Xinghua,Sacher,Adrian,Hu,Jim,Waddell,Thomas K.Journal of Clinical Investigation.2009(2)

[2]Mesenchymal Stem Cell-Mediated Immunosuppression Occurs via Concerted Action of Chemokines and Nitric Oxide[J].Guangwen Ren,Liying Zhang,Xin Zhao,Guangwu Xu,Yingyu Zhang,Arthur I.Roberts,Robert Chunhua Zhao,Yufang Shi.Cell Stem Cell.2008(2)

[3]Immunological properties of mesenchymal stem cells and clinical implications[J].Shyam A.Patel,Lauren Sherman,Jessian Munoz,Pranela Rameshwar.Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis.2008(1)

[4]Evidence of Temporary Airway Epithelial Repopulation and Rare Clonal Formation by BM‐derived Cells Following Naphthalene Injury in Mice[J].Vladimir B.Serikov,BorisPopov,Viacheslav M.Mikhailov,NaveenGupta,Michael A.Matthay.Anat Rec.2007(9)

[5]曾宪升.人骨髓间充质干细胞对间质性肺纤维化的抗损伤治疗机制及黄酮化合物的协同效应[D].广州医学院,2011.