磷脂酰肌醇激酶(抗体)的应用

背景^[1-3]

磷脂酰肌醇激酶(抗体)是可以特异性结合磷脂酰肌醇激酶的一类多克隆抗体，主要用于检测磷脂酰肌醇激酶的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中磷脂酰肌醇激酶水平。用纯化的磷脂酰肌醇激酶抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入磷脂酰肌醇激酶，再与HRP标记的磷脂酰肌醇激酶抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的磷脂酰肌醇激酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中磷脂酰肌醇激酶浓度。

磷脂酰肌醇激酶是磷脂酰肌醇3-激酶、磷脂酰肌醇4-激酶和磷脂酰肌醇4-磷酸5-激酶的统称。分别特异地催化1-磷脂酰-1D-肌醇环上3、4或5位羟基磷酸化的酶。

磷脂酰肌醇主要由两部分组成的，一是磷酸1,2-二脂酰甘油，二是肌醇(inositol)。在细胞中对于细胞形态、代谢调控、信号传导和细胞的各种生理功能起着非常重要的作用。

应用^[4][5]

用于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路在中耳胆脂瘤发病机制中的作用研究

探讨P-EGFR、P-Akt、cyclinD1和PCNA蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织中的表达及其意义。

方法：采用免疫组织化学方法检测40例后天性中耳胆脂瘤组织和20例正常外耳道皮肤组织中P-EGFR、P-Akt,、cyclinD1和PCNA蛋白的表达水平,并分析它们之问的相关性。

结果：40例中耳胆脂瘤上皮组织标本中P-EGFR蛋白阳性率为65.0%(26/40);P-Akt蛋白阳性率为72.5%(29/40)；cyclinD1蛋白阳性率为62.5%(25/40);PCNA蛋白阳性率为80.0%(32/40)。

对照组20例正常外耳道皮肤组织中P-EGFR蛋白阳性率为20.0%(4/20);P-Akt蛋白阳性率为35.0%(7/20);cyclinD1蛋白阳性率为10.0%(2/20);PCNA蛋白阳性率为45.0%(9/20)。经统计学分析：P-EGFR、P-Akt、cyclinD1和PCNA四种蛋白在中耳胆脂瘤组和正常外耳道皮肤组中的表达差异均有显著的统计学意义(P<0.05)；中耳胆脂瘤组中P-EGFR与P-Akt的表达、P-Akt与cyclinD1的表达、cyclinD1与PCNA的表达均呈显著正相关(P<0.05)。

结论：1.P-EGFR、P-Akt、cyclinDl和PCNA蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织中的表达增高,且中耳胆脂瘤组中P-EGFR与P-Akt的表达、P-Akt与cyclinD1的表达、cyclinD1与PCNA的表达均呈显著正相关,提示中耳胆脂瘤上皮细胞中EGFR活化的同时伴随着其下游效应因子P-Akt,cyclinD1和PCNA的活化。

2.EGFR/PI3K/Akt信号通路可能在中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制中起到重要作用,参与了中耳胆脂瘤的发病机制。

参考文献

[1]Post-Transcriptional Regulation by MicroRNA-21 and let-7a MicroRNA in Paediatric Cholesteatoma[J].X Chen,Z Qin.Journal of International Medical Research.2011(6)

[2]EGFR expression in acquired middle ear cholesteatoma in children and adults[J].Adriana Leal Alves,Celina Siqueira Barbosa Pereira,Maria de Fatima Pereira Carvalho,Jose Humberto Tavares Guerreiro Fregnani,Fernando Quintanilha Ribeiro.European Journal of Pediatrics.2012(2)

[3]Increased amphiregulin expression as a biomarker of cholesteatoma activity[J].MiMi P.Macias,Richard D.Gerkin,John D.Macias.The Laryngoscope.2010(11)

[4]Acquired cholesteatoma pathogenesis:stepwise explanations[J].L Louw.The Journal of Laryngology&Otology.2010(6)

[5]刘伟.磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路在中耳胆脂瘤发病机制中的作用研究[D].中南大学,2012.