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桑黄素的提取方法

发布日期:2020/9/1 10:45:21

背景及概述[1]

桑黄又名桑耳、胡孙眼、梅树菌,是一种名贵的多年生大型食药用菌,属担子菌亚门(Basidiomycota)、层菌纲(Hymenomycetes)、多孔菌目(Polyporales)、多孔菌科(Polyporaceae)、针层孔菌属(Phelliunus),它主要寄生于桑树、桦树、杨树等阔叶树的树干上,有“森林黄金”的美称。据目前研究表明,桑黄中所含有各种化学物质不下百种,并且这些化学物质大多数都有药理活性,能够治疗多种疾病,有良好的应用和开发前景。

桑黄素属于多酚类化合物,此类化合物可以作为天然色素,而且具有很好的抗氧化、清除自由基、抗肿瘤和降血糖的药用作用,具有很高的利用价值。

提取方法[1-2]

报道一、

一种利用大孔树脂从桑黄中静态吸附桑黄素的方法,包括以下步骤:

(1)种子液的制备:取生长良好的桑黄平板,用灭菌后的的打孔器,打取直径为0.5cm生长一致的菌饼5块,加入到含有100mL液体培养基的250mL三角瓶中,恒温28℃,转速180r/min,培养7天,然后用高速匀浆机将菌丝球打碎,制得种子液;

其中,桑黄购于中国农业科学研究院菌种保藏中心,编号为ATCC36121。

液体培养基由以下组分组成:葡萄糖20g、磷酸二氢钾0.46g、磷酸氢二钾1g、七水合硫酸镁0.5g、蛋白胨2g、酵母粉2g和去离子水1L;

(2)发酵培养:将种子液按体积百分比为10%的接种量接种到发酵罐中,发酵罐装液量为4.5L,然后在28℃,180r/min,通气量为0.6vvm条件下培养8天,得发酵液;

(3)过滤:将发酵液经过滤纸过滤,除去菌丝球,得发酵滤液,该发酵滤液中桑黄素浓度为6.78mg/mL;

(4)吸附:调整发酵滤液pH值至5,然后加入大孔树脂,在20℃,150r/min条件下震荡24h,此时达到吸附平衡;其中,发酵滤液与大孔树脂的比例关系为1mL:4g;大孔树脂为ADS-17;

(5)解析:将吸附平衡的大孔树脂抽滤,洗净表面的样品溶液后,放入容器中,并加入体积百分比为70%的乙醇溶液,在20℃,转速150r/min条件下震荡24h,此时达到解析完全,然后对解析液进行浓缩,纯化,制得桑黄素。

报道二、

一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法,其步骤如下:

(1)将100g桦树桑黄粉碎后过50目筛,深层发酵,培养基组成为:玉米粉6.5g,酵母粉0.6g,CaCl20g,KH2PO40.4g,MgSO40.13g;最适培养条件为:500mL摇瓶量120mL,接种量15g,转速200r/min,温度35℃,初始pH5.3。在此条件下发酵11天。

(2)将经(1)培养好的发酵培养物过滤,得发酵液上清和菌体,用70%甲醇浸提料液比1∶30(g/mL)、40℃超声处理30min和微波功率400W、微波时间3min双辅助。

(3)合并(2)中提取液减压浓缩,得石油醚相和水相;

(4)将(3)中所得水相用乙酸乙酯萃取;

(5)将(4)中所得有机相减压浓缩后用硅胶柱层析,氯仿-甲醇(95∶5)梯度洗脱;

(6)把(5)中所得产物用聚酰胺树脂吸附色谱法对其进行分离纯化,动态吸附上样量1∶55g/g、上样浓度2.150mg/mL、吸附流速和解析流速均为1mL/min、吸附时间60min、75%乙醇作为洗脱剂,用高效液相色谱法检测可得桑黄素92.4%。

参考文献

[1][中国发明]CN201910646980.5利用大孔树脂从桑黄中静态吸附桑黄素的方法

[2][中国发明]CN201610922399.8一种从桦树桑黄提取桑黄素的新方法

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