血浆游离DNA提取试剂盒的应用

背景^[1-3]

血浆游离DNA提取试剂盒适合于从血浆、血清等无细胞组织液中提取游离DNA（Circulating free DNA,cfDNA）片段,纯化的cfDNA产量高、质量好，限度去除蛋白、脂类及其他抑制性杂质污染，可直接用于各种下游操作，包括基因测序（例如无创产前基因检测、肿瘤检测）、文库构建等。

血浆游离DNA提取试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和独特的缓冲液系统，从血清，血浆等样本中分离纯化高质量游离DNA。独特包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。整个过程安全、便捷，提取的游离DNA得率高，纯度高，质量稳定可靠，尤其适合高通量工作站的自动化提取。

血中cfDNA简称循环核酸（circulating free DNA），是指循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性DNA。在这里，循环核酸不可顾名思义为循环血中的核酸类物质，所有细胞内的核酸，血中游离的内源性脱氧核糖核酸和外源性DNA与RNA，如真菌血症、细菌血症和病毒血症等病理情形下的血中外源核酸，虽然其在临床医学中具有重要意义但均不属于严格意义的血中cfDNA范畴。

血中cfDNA在疾病的早期诊断、预后、监测等方面具有重要潜在价值。其具体医学应用大致包括以下方面：

1.用于产前诊断；

2.用于免疫性疾病等非肿瘤类疾病的病情分析与疗效观察；

3.用于肿瘤相关分析。

在上述三类应用中，其在肿瘤分析中的价值尤为重要，虽然目前血中cfDNA分析尚未列为临床必需的检测指标，但数以千计的研究论文和大量一期和二期临床试验的数据，有力支持这一新技术在肿瘤防治中的巨大应用价值。

应用^[4][5]

用于血浆游离DNA定量检测及COL14A1基因异常甲基化分析在食管鳞癌诊断中的意义研究

与肝癌、肠癌、卵巢癌等常见肿瘤相比,食管癌的诊断和监测尚缺乏相对有效的肿瘤标志物。循环游离)NA(circulating cell-free DNA,cfDNA),是指血清或血浆中游离于细胞外的DNA片段。已有研究显示,对循环游离DNA进行定量检测有潜在的肿瘤标志物作用。但这些研究研究数据相差较大,对食管鳞癌的研究也并不多见。本研究的目的是对血浆游离DNA定量检测在鉴别食管鳞癌与健康人的能力进行研究,探讨血浆游离DNA定量检测在食管鳞癌诊断中的潜在临床应用价值。

方法：对60例健康人、49例食管鳞癌患者的血浆标本提取并纯化血浆游离DNA,应用实时荧光定量PCR(SYBR GreenⅠ)方法进行定量检测,分析健康人与食管鳞癌患者之间、不同临床病理特征食管鳞癌患者之间血浆游离DNA水平的差异,并通过ROC曲线对血浆游离DNA水平诊断食管鳞癌的能力进行评价。

结果：(1)60例健康人血浆游离DNA含量中位数为17.91ng/m1,四分位区间：12.99～29.90ng/ml。其中男性组血浆游离循环DNA水平中位数(19.10ng/m1)与女性组(17.17ng/m1)无显著差异(P=0.382)；≤60岁组(18.17ng/m1)与>60组(15.46ng/m1)亦无显著差异(P=0.374)。

(2)49例食管鳞癌患者血浆游离DNA含量中位数为49.72ng/m1,四分位区间：28.17-68.42ng/m1。其中男性组血浆游离循环DNA中位数(51.14ng/m1)与女性组(38.26ng/m1)差异无统计学意义(P=0.382),≤60岁组(45.81ng/m1)与>60组(51.14ng/m1)差异亦无统计学意义(P=0.374)。

参考文献

[1]Comparative evaluation of cell-free tumor DNA in blood and disseminated tumor cells in bone marrow of patients with primary breast cancer.Schwarzenbach Heidi,Pantel Klaus,Kemper Birthe,Beeger Cord,Otterbach Friedrich,Kimmig Rainer,Kasimir-Bauer Sabine.Breast cancer research:BCR.2009

[2]Circulating tumor cells and aberrant methylation as tumor markers in patients with esophageal cancer.Ikoma Daito,Ichikawa Daisuke,Ueda Yuji,Tani Nobuyuki,Tomita Haruhisa,Sai Soujin,Kikuchi Shojiro,Fujiwara Hitoshi,Otsuji Eigo,Yamagishi Hisakazu.Anticancer Research.2007

[3]Phase I/II study of GSK2118436,aselective inhibitor of oncogenic mutant BRAF kinase,in patients withmetastatic melanoma and other solid tumors.Kefford R,Arkenau H,Brown M P,et al.Journal of Clinical Oncology.2010

[4]Circulating mutant DNA to assess tumor dynamics.Diehl Frank,Schmidt Kerstin,Choti Michael A,Romans Katharine,Goodman Steven,Li Meng,Thornton Katherine,Agrawal Nishant,Sokoll Lori,Szabo Steve A,Kinzler Kenneth W,Vogelstein Bert,Diaz Luis A.Nature Medicine.2008

[5]蒋春雨.血浆游离DNA定量检测及COL14A1基因异常甲基化分析在食管鳞癌诊断中的意义[D].南方医科大学,2014.