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多粘菌素E甲磺酸钠的分析方法

发布日期:2020/10/26 11:48:35

背景及概述[1][2]

多黏菌素E(colistin)是一个由多种组分组成的多肽类抗生素,主要由E1 和E2组成(或称为A或B)。在20世纪50年代,多黏菌素E就应用于临床,主要用于革兰氏阴性菌引起的感染,特别是由多重耐药绿脓杆菌引起的感染的治疗。临床使用的多黏菌素E有两种,一种是口服或局部使用的硫酸多黏菌素E(也称硫酸黏菌素),另一种是供注射用的多黏菌素E甲磺酸钠(Colistimethate Sodium)。多黏菌素E甲磺酸钠之所以能作为注射剂使用,是因为它的毒性较硫 酸多黏菌素E显著降低,LD50降低了50倍以上。多黏菌素E甲磺酸钠是由1分子的多黏菌素E和5分子的甲醛形成西佛氏碱后再同5分子亚硫酸氢钠通过共价键结合而成。由于多黏菌素E是多组分药物,主要是由E1和E2组成,因此多黏菌素E甲磺酸钠也是由多黏菌素E1甲磺酸钠和多黏菌素E2甲磺酸钠组成。多黏菌素E1甲磺酸钠的分子量为1749.82;多黏菌素E2甲磺酸钠的分子量为 1735.80。

制备及分离纯化[1]

关于多黏菌素E甲磺酸钠的合成方法已属公知技术,就是由1分子的多黏菌素E和5分子的甲醛形成西佛氏碱后再同5分子亚硫酸氢钠通过共价键结合而成,具体合成反应为:以硫酸多黏菌素E为原料,用水溶解后,先加甲醛溶液,然后再加亚硫酸氢钠溶液进行反应,即可。可以看出,在多黏菌素E甲磺 酸钠的制备过程中可能引入的杂质有:未反应完全的硫酸多黏菌素E原料,及由该原料引入的硫酸根和过量的反应物甲醛和亚硫酸氢钠。因此,要想得到纯度较高的目的产物,必须程度地去除这些杂质,这样才能得到高活性的多黏菌素E甲磺酸钠。    CN200810020478.5提供一种将多黏菌素E甲磺酸钠从含有小分子量杂质的混合物中分 离纯化的方法,所述的分离纯化方法包括通过超滤膜分离技术进行分离纯化,使用的超滤膜的截流分子量一般在1000~10000之间,优选截流分子量在2000~6000之间的超滤膜。其中超滤膜可以是有机材料膜,如有机纤维素膜、聚砜膜等,也可以是各种无机材料膜,如陶瓷膜、黏土膜和金属膜等,优选使用有机材料膜,更优选有机纤维素膜或聚砜膜。

具体举例如下:

称取80g(约0.057mol)硫酸多黏菌素E(产品批号为20061001,其质量符合欧洲药典标准,其中多黏菌素E1和E2的含量为71%),加水溶解并定容至 400ml,然后加甲醛溶液49.6ml(约0.661mol),搅拌并用10mol/L NaOH溶液调节pH至7,维持反应30min后,向其中加入224ml(约0.862mol)40%的 亚硫酸氢钠溶液,然后再用NaOH溶液调节pH至7,并在搅拌下反应10h后停止反应。取此反应液,用截流分子量为3000的超滤膜(为美国MILLIPORE公司的 产品,为醋酸纤维素膜)超滤至约130ml,然后加水至约675ml,再超滤浓缩至 130ml,如此反复5次,得超滤截留液约135ml。在整个反应和超滤期间控制温 度在20~25℃。取超滤截留液,用低温冷冻干燥法,进行产品的干燥,得到多黏菌素E甲磺酸钠产品64.8g,收率为81%。产品为白色无定形粉末,经检查产品中不含有硫酸根和游离的多黏菌素E,甲醛残留量为0.0028%,效价达到 440μg/mg。

分析方法[2]

CN201110032540.4提供一种操作简单、重现性好、灵敏度高、准确性强,易于标准化操作的多黏菌素E甲磺酸钠中各个组份的分析方法,即提供一种多黏菌素E甲磺酸钠的组份组成分析方法。本发明提供的多黏菌素E甲磺酸钠的组份分析方法,其特征在于:采用酸化后高温水解的方法将多黏菌素E甲磺酸钠溶液转变为多黏菌素E溶液,然后以多黏菌素E的组分组成来表征多黏菌素E甲磺酸钠的组份组成。具体包括如下步骤:(a)将多黏菌素E甲磺 酸钠加水溶解,制成一定浓度的溶液;(b)采用酸化后高温水解的方法将多黏 菌素E甲磺酸钠溶液转变为多黏菌素E溶液;(c)采用反相高效液相色谱分析多黏菌素E的组成;(d)以多黏菌素E的组分组成来表征多黏菌素E甲磺酸钠的组份组成。,该方法巧妙的将多黏菌素E甲磺酸钠完全的转变为多黏菌素E,通过对多粘菌素E各个组分的含量分析得出多黏菌素E甲磺酸钠各个组分的含量。该方法具有如下的优点:(1)本发明提供的将多黏菌素E甲磺酸钠转变为多黏菌素E方案简单易行、便于标准化操作,在该转变条件下,多黏菌素E甲磺酸钠可以完全的转 变为多黏菌素E且各个组分不会相互转化,而多黏菌素E在此条件下能保持稳定。(2)本发明采用了现有经过验证的高效液相分析方法来测定各个组分的含量,这样可以保证测试的结果真实有效。

主要参考资料

[1] CN200810020478.5 一种多黏菌素E甲磺酸钠的分离纯化方法

[2] CN201110032540.4 多黏菌素E甲磺酸钠的分析方法

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