载体构建和蛋白表达服务的内容与说明

背景及概述^[1][2]

载体构建是以某个质粒为基础(如pBR322)，插入特殊的酶切位点、抗性基因、供筛选用的标记基因等，构建成可以插入外源基因的新载体的过程。例如在构建以病毒为表达载体的转移载体时，还需要加入启动子及重组同源序列。现已构建成许多原核、真核系统的载体。载体构建是分子生物学研究中最常用的实验技术。哺乳动物细胞表达系统能够为重组人源蛋白提供最接近于天然状态的翻译后修饰，在蛋白表达过程中会形成接近天然蛋白的蛋白质折叠和聚合，具备活性蛋白所必须的空间结构和修饰。这一特性使得哺乳动物细胞表达系统在重组蛋白药物，特别是治疗性重组单抗药物的研发和生产中有最为广泛的应用。近十年来，大规模悬浮培养哺乳动物细胞瞬时转染技术的发展，使得在短时间内获得较多数量的重组蛋白成为可能。

实验步骤^[2]

 (1) 目的DNA片段和载体的制备；

(2) 目的DNA片段和载体的连接；

(3) 连接产物的转化；

(4) 克隆筛选。

服务内容^[2]

1. 以PCR为基础的各类载体构建，如细菌表达载体、杆状病毒表达载体、哺乳动物表达载体等；

2. 基因突变，包括单点突变，多点突变，基因缺失等；

3. 载体改造。

4、表达载体的小试表达验证

5、表达产物SDS—PAGE或者WB鉴定（目前暂无其它鉴定）

6、Western blot检测转染质粒的表达情况

7、表达蛋白体内和体外功能研究

服务说明^[2]

1. 客户提供载体构建及改造所需的实验方案，目的基因产物及序列（如果目的基因不好制备），载体（如果供应商载体库里没有）及相关背景资料。

2. 若客户只提供组织、细胞等样本，还需提供目的基因NCBI登录号，供应商将额外收取RNA提取及逆转录费用。

3. 表达载体序列资料、希望克隆到的载体、酶切位点等资料；

4. 对于供应商已有的载体和模版，免费提供。

实验报告内容^[2]

1. 含目的片段的质粒、含该质粒的细菌各一份；

2. 引物序列、载体图谱一份、测序结果各一份；

3. 载体构建实验所需试剂耗材、仪器设备、操作过程一份。

4、表达的蛋白；

5、完整实验报告。

参考文献

[1] 兽医大辞典

[2] 载体构建和蛋白表达服务技术说明书