免疫组化实验--IHC检测的技术路线

背景及概述^[1][2]

免疫组化学试验又称酶标免疫组织化学法，其原理与dot-ELISA相同，不同处仅用组织切片或细胞样品代替固相抗原。免疫组织化学实验--IHC检测（Immunohistochemistry）是一项以免疫学的抗原-抗体反应为理论基础，应用理化方法显示细胞结构的物质成分，进而分析研究细胞和组织的代谢、功能及其形态变化的实验技术。该方法将抗原-抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有效结合起来，即用酶标记抗体，以酶与底物的显色反应对抗原进行示踪，并对呈色反应后的免疫阳性产物做半定量分析。

技术路线^[2]

样品制备：

组织样品的制备方法决定了如何用抗体检测抗原。选择满足预期实验结果需要的组织类型相兼容的固定方法是很重要的。如果您需要好的抗原修复结果并且不必保持细胞形态，则使用冰冻组织或丙酮固定。当需要保持细胞形态时，福尔马林固定石蜡包埋（FFPE)组织样品是一个好的选择。

抗原修复：

抗原修复是免疫组化（IHC）在进行抗体标记前的必要步骤，因为组织的固定过程通常会引起蛋白交联。这在使用福尔马林固定时因其化学属性而经常发生，但可以通过加热（最常用的方法）、简易缓冲液处理或蛋白酶消化而轻松实现逆转。处理的方式可根据抗体检测所需的表位构型而进行选择。该步骤可使得抗原表位被重新暴露以便于抗体的结合。

材料提供^[2]

须在实验开始前提供详细的样品资料（如组织来源等），尽可能详细的背景资料，包括蛋白的种属、定位、参考文献等，以便于实验的顺利进行。

提供的石蜡切片，必须保证片子的质量以及准确性，供阴阳性对照标本或切片供阴阳性对照标本或切片；一抗，标明来源和稀释度。

IHC所需要的目的蛋白的一抗。

参考文献

[1] 微生物学词典

[2] 免疫组化实验--IHC检测技术说明书