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免疫荧光实验检测服务流程

发布日期:2020/2/5 10:44:14

背景及概述[1][2]

免疫荧光技术是利用抗原抗体反应的特异性,把抗原或抗体标记上荧光素,通常用硫氰酸盐荧光素(FITC),与相应的抗原或抗体结合后,在荧光显微镜下可观察到发荧光的抗原抗体反应物。如果用已知的荧光抗体检查未知抗原则叫荧光抗体技术;用荧光素标记已知抗原检查未知抗体,叫荧光抗原技术。免疫荧光技术可以比较准确、快速、敏感地测出少量抗原、抗体以及抗原抗体复合物在细胞或组织内的定位及分布。免疫荧光实验检测服务(Immunofluorescence technique )是在免疫学、生物化学和荧光成像系统基础上建立起来的检测技术。技术原理是根据抗体-抗原特异结合,以荧光标记抗体示踪组织或细胞内相应抗原。免疫荧光技术因特异性强、灵敏度高和操作简便的优势广泛应用于免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等生物学和医学。

免疫荧光(IF)检测服务内容[2]

服务项目

周期

报价

1. 常规组织、细胞的免疫荧光检测(宽场显微镜拍照、共聚焦显微镜 XYZλt 多维度扫描)

3-5 个工作日

细胞爬片:100 元/张

2. 靶点的亚细胞定位及共定位

询价

3. 特殊实验,如光漂白实验

询价

技术流程[2]

细胞爬片:将细胞按20%-30%的汇合度接种到24孔细胞培养板中的圆形盖玻片上。

细胞固定:4%冷的多聚甲醛固定20分钟,PBS洗三遍。

细胞通透:Triton X-100 通透20分钟,PBS洗三遍。

封闭:用与二抗相同宿主的血清封闭30分钟,PBS洗三遍。

一抗孵育:一抗4度湿盒内过夜,也可37度2小时,PBS洗三遍。

二抗孵育:二抗室温孵育2小时或者37度1.5小时(避光),PBS洗三遍。

DAPI染核:在二抗孵育1小时后加入终浓度为100ng/ml的DAPI继续孵育。然后可在荧光显微镜下观察或直接封片保存。

甘油封片:在载玻片上滴一小滴甘油,小心地将细胞爬片从细胞培养板中取出来,种植有细胞的一面朝下轻轻的盖在甘油上,避免产生过气泡。4度孵育过夜晾干。

免疫荧光(IF) 检测服务流程

参考文献

[1] 卫生学大辞典

[2] 免疫荧光实验检测服务技术说明书

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