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快速制备小鼠多抗3-4周的使用方法

发布日期:2020/2/5 10:44:14

背景及概述[1][2]

将抗原性物质免疫动物,由于这种物质多由不止一种抗原分子组成,有时即使是一种,也是由多种抗原决定簇组成,这种抗原可刺激具有相应抗原受体的不同淋巴细胞克隆,因此产生多种抗血清抗体——多克隆抗体。通过三至四周两针的快速免疫程序快速制备小鼠单克隆和多克隆抗体,ELISA滴度(Cutoff值为0.1000)可达到1:10000~1:100000或更高。如quickantibody系列免疫佐剂包括四种具有自主知识产权、独特配方的新型免疫佐剂,分别用于制备小鼠单克隆和多克隆抗体以及兔子多克隆抗体,与常规使用的弗氏佐剂相比,具有免疫针次少、抗原用量低、抗体产生快、抗体滴度高、抗体亲合力高、不破坏抗原天然构象和使用方便等多方面优点。

使用方法[2]

1、用生理盐水将抗原稀释到2倍最终浓度(按每针次50μl用量配制)。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5~20μg;(2)免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1~5μg。

2、充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需用量(按每针次50μl)与抗原按体积比1:1迅速混匀。备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。

3、通过后腿小腿肌肉注射免疫小鼠,每只小鼠注射100μl。备注:本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象,抽入针管前应充分混匀,抽入针管后应尽快注射。

4、第14天按同样方式加强免疫一针。备注:每次佐剂和抗原现配现用。

5、第21天采微量尾血进行ELISA测定,抗体滴度应达到1:10000~1:100000或更高,随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免疫和脾细胞融合。

参考文献

[1] 儿科学辞典

[2] 快速制备小鼠多抗3-4周技术说明书

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