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D-Hanks缓冲液(含酚红)

发布日期:2020/3/13 8:57:40

背景及概述[1]

缓冲液是含有弱酸及其盐的混合物的一种溶液。它能抗酸碱度的少量变化,因此能提供酶反应的有利环境。但各种酶反应所需要的缓冲离子种类与浓度以及pH不尽相同,所以每种酶反应有其最适的缓冲液。Hank's液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液(HanksBalancedSaltSolution,HBSS),主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、以及配制其他试剂等。D-Hank's与Hank's的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子,因此D-Hank's可用于配制胰蛋白酶消化液(钙镁离子可抑制胰蛋白酶活性)。缓冲液中酚红起pH指示作用。

D-Hanks缓冲液(含酚红)又叫D-Hanks缓冲液(HBSS),含酚红,不含钙镁,pH7.2-7.4,15-30℃保存。D-Hanks缓冲液(含酚红)是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料,一般都含有培养基有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。

D-Hanks缓冲液(含酚红)使用步骤:

(一)准确称量试剂:根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。

(二)校正pH值:将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定。用1NNaOH和1NHCl调节pH值到适宜范围内。

(三)过滤:将玻璃漏斗置铁架上,再用D-Hanks缓冲液纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。

(四)分装:将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。

(五)灭菌:培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性,须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。

根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理,即压力越大,蒸汽温度就越高。因此,在同一温度条件下,采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下,菌体吸收水分后,其蛋白质易于凝固变性,因为蒸汽的穿透力强,杀菌效果好。

主要参考资料

[1] 协和医学词典

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2020-03-13
D-Hanks缓冲液(含酚红)