网站主页 人保护素(PT)ELISA试剂盒 新闻专题 人保护素(PT)ELISA试剂盒

人保护素(PT)ELISA试剂盒

发布日期:2020/4/8 8:35:35

背景[1-7]

人保护素(PT)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被兔脂肪酸合成酶(FAS)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的兔脂肪酸合成酶(FAS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

检测样本要求

1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3.组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

应用[8][9]

人保护素(PT)ELISA试剂盒可用于人骨保护素(hOPG)基因的生物活性及防治人工关节无菌性松动的实验研究:

OPG/RANKL/RANK系统在破骨细胞分化增殖中起着重要的作用,这是骨骼生理研究领域的重大进展之一。骨保护素(osteoprotegerin,OPG)是1997年发现的分泌型糖蛋白,能抑制破骨细胞分化、抑制成熟破骨细胞的活性并诱导其凋亡。成骨细胞、骨髓基质细胞及活化的T淋巴细胞均表达RANKL,与破骨细胞前体细胞或成熟破骨细胞表面上的RANK结合后,促进破骨细胞的分化及骨吸收活性。

成骨细胞及骨髓基质细胞分泌表达OPG可与RANKL竞争性结合,从而阻断RANKL与RANK之间的相互作用。体内多种激素或因子如TNF-α、TGF-β、1,25(OH)2D3、雌激素、骨形态发生蛋白-2以及PTH、PGE2、糖皮质激素等均通过影响骨髓微环境内的OPG/RANKL比率来调节骨代谢。此外,随着现代人工关节技术与相关研究的飞速发展,人工关节置换术已成为治疗各种关节疾病终末期病变最普遍而有效的方法。但假体周围骨质溶解导致人工关节无菌性松动这一问题尚未得到很好的解决,成为这项技术进一步发展的瓶颈和研究热点。

近十年的研究认为:人工关节无菌性松动主要与假体长期磨损或离解产生的颗粒所诱导的生物学反应有关。这生物学反应过程包括:(1)磨损颗粒的产生,(2)假体—骨界面间异物反应膜的形成,(3)破骨细胞性骨溶解,导致假体的骨性支持结构力学性能下降。尤其是破骨细胞性骨溶解在关节假体松动中的作用被认为意义重大。

研究目的:通过深入研究OPG基因的表达、生物活性以及假体周围破骨细胞性骨溶解的机制,采用基因治疗方法、应用种子细胞工程及ex vivo技术,调控OPG基因在关节松动的假体周围达到较持续的OPG蛋白表达,达到抑制假体周围破骨细胞性骨溶解的目的。可望为防治人工关节无菌性松动提供新的思路和治疗手段。本研究工作分为以下三部分:1.Ad-hOPG的构建、制备、及表达鉴定;2.大鼠骨髓基质细胞(rMSCs)的生物学特性及Ad-hOPG在rMSCs中的表达;3.转染Ad-hOPG的rMSCs对大鼠人工关节无菌性松动的防治作用。

参考文献

[1]Bone Morphogenetic Protein Gene Therapy[J].Tord D.Alden,Peter Varady,David F.Kallmes,John A.Jane,Gregory A.Helm.Spine.2002(16S)

[2]Osteoprotegerin Ligand Is a Cytokine that Regulates Osteoclast Differentiation and Activation[J].D.L Lacey,E Timms,H.-L Tan,M.J Kelley,C.R Dunstan,T Burgess,R Elliott,A Colombero,G Elliott,S Scully,H Hsu,J Sullivan,N Hawkins,E Davy,C Capparelli,A Eli,Y.-X Qian,S Kaufman,I Sarosi,V Shalhoub,G Senaldi,J Guo,J Delaney,W.J Boyle.Cell.1998(2)

[3]Osteoclast Differentiation Factor(ODF)Induces Osteoclast-like Cell Formation in Human Peripheral Blood Mononuclear Cell Cultures[J].Kenichiro Matsuzaki,Nobuyuki Udagawa,Naoyuki Takahashi,Kyoji Yamaguchi,Hisataka Yasuda,Nobuyuki Shima,Tomonori Morinaga,Yoshiaki Toyama,Yutaka Yabe,Kanji Higashio,Tatsuo Suda.Biochemical and Biophysical Research Communications.1998(1)

[4]Osteoprotegerin:A Novel Secreted Protein Involved in the Regulation of Bone Density[J].W.S Simonet,D.L Lacey,C.R Dunstan,M Kelley,M.-S Chang,R Lüthy,H.Q Nguyen,S Wooden,L Bennett,T Boone,G Shimamoto,M DeRose,R Elliott,A Colombero,H.-L Tan,G Trail,J Sullivan,E Davy,N Bucay,L Renshaw-Gegg,T.M Hughes,D Hill,W Pattison,P Campbell,S Sander,G Van,J Tarpley,P Derby,R Lee,W.J Boyle.Cell.1997(2)

[5]Isolation of a Novel Cytokine from Human Fibroblasts That Specifically Inhibits Osteoclastogenesis[J].Eisuke Tsuda,Masaaki Goto,Shin-ichi Mochizuki,Kazuki Yano,Fumie Kobayashi,Tomonori Morinaga,Kanji Higashio.Biochemical and Biophysical Research Communications.1997(1)

[6]Increased risk of tooth loss is related to bone loss at the whole body,hip,and spine[J].E.A.Krall,R.I.Garcia,B.Dawson-Hughes.Calcified Tissue International.1996(6)

[7]NF-kappa B-dependent induction of osteoprotegerin by porphyromonas gingivitis in endothelial cells.Kobayashi Sakamoto M,Hirose K,Isogai E,et al.Biochemical and Biophysical Research Communications.2004

[8]Expression of RANKL and OPG mRNA in periodontal disease:possible involvement in bone destruction.Liu,D,et al.International Journal of Molecular Medicine.2003

[9]王晓军.人骨保护素(hOPG)基因的生物活性及防治人工关节无菌性松动的实验研究[D].第三军医大学,2006.

分享 免责申明

欢迎您浏览更多关于人保护素(PT)ELISA试剂盒的相关新闻资讯信息