红链霉素-龙胆二糖苷的提取方法

背景及概述^[1]

红链霉素-龙胆二糖苷为决明子中主要萘骈吡喃酮类成分，具有降血脂、保肝、抗突变、抗雌激素等作用，为决明子主要药效成分之一。在对决明子化学对照品红红链霉素-龙胆二糖苷霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的稳定性研究表明，红链霉素-β-龙胆二糖苷对照品在60℃以下，相对湿度90％，加热8h后仍有85.0％以上剩余，但是随着温度增高，湿度增大，红链霉素-6-O-β-龙胆二糖苷稳定性逐渐降低。表明其在较低温度环境及含水较少的溶液中，红链霉素-6-O-β-龙胆二糖苷稳定性较好，红链霉素-β-龙胆二糖苷的分离制备方法主要有：采用20％～50％乙醇加热回流提取得决明子提取物浸膏，浸膏用甲醇回流提取得甲醇提取物；甲醇提取物采用硅胶干柱色谱法分离得到红链霉素-龙胆二糖苷粗品，粗品采用硅胶干柱色谱法、C18反相色谱柱纯化得到红链霉素-龙胆二糖苷黄色粉末，其主要工艺步骤中用含水乙醇加热回流提取，需要较高温度且湿度较大，容易破坏红链霉素-龙胆二糖苷的结构，且在制备过程中用的试剂量很大，不利于大规模推广应用。

提取方法^[1]

一种制备红链霉素龙胆二糖苷的方法，包括以下步骤：

1）取决明子药材，加入按药材重量计15~20倍的60~95％甲醇，加热回流提取3~4h，静置，过滤；药渣用同样方法再提取1～3次，合并提取液，30~40℃水浴减压回收溶剂，得决明子提取物浸膏；

2）经步骤1）后，取决明子提取物浸膏，加入按决明子提取物浸膏重量计10~50倍的乙醇，回流提取3~5次，每次提取0.5~2h，过滤，取上清液，回收溶剂得乙醇提取物；

3）经步骤2）后，取乙醇提取物，加入按乙醇提取物质量计6~8倍体积份的乙醇溶解，按乙醇提取物与硅胶质量比1：3.5~5拌入80~180目的硅胶，真空干燥，得到拌样硅胶，另按乙醇提取物与硅胶质量比1：80~120取100~150目的硅胶，干法装柱，色谱柱径高比1：6~8；将拌样硅胶装于柱顶，以体积比为9~12：1~3：1~5的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，下行法进行干柱层析，洗脱4~6倍柱体积，置阴凉避光处挥干展开剂，自柱头而底部平均切割为18~22份，各切割份用乙醇洗脱，乙醇洗脱液用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的12~15至16~20份乙醇洗脱液，回收溶剂，得红链霉素龙胆二糖苷粗品；

4）取红链霉素龙胆二糖苷粗品用丙酮溶解，按红链霉素龙胆二糖苷粗品与硅胶的质量比1：2~6拌入100~180目的硅胶，真空冷法干燥，得到粗品拌样硅胶，另按红链霉素龙胆二糖苷粗品与硅胶质量比1：80~100取60~150目的硅胶，干法装柱，色谱柱径高比1：6~9；将粗品拌样硅胶加于柱顶，以体积比为9~12：1~3：1~5的氯仿-甲醇-水混合溶剂洗脱，下行法进行干柱层析，分份收集，洗脱液用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的流份，回收溶剂，得红链霉素龙胆二糖苷半成品；

5）取步骤4）中红链霉素龙胆二糖苷半成品，用按红链霉素龙胆二糖苷半成品质量计为2~4体积份的50~80％乙醇溶解，采用C18反相色谱柱纯化，径高比1：9~12，以20％~50％乙醇洗脱，采用硅胶薄层色谱检识，合并含有红链霉素龙胆二糖苷的流份，回收溶剂得黄色粉末，即为红链霉素龙胆二糖苷。

主要参考资料

[1] CN201610699516.9一种制备红链霉素龙胆二糖苷的方法