启动子、增强子报告基因载体构建

启动子／增强子报告基因载体构建，方法是应用PCR技术，从基因组DNA中扩增出待构建基因的启动子／增强子DNA序列，构建于报告基因上游，分别转染体外培养的细胞中，分析启动子和增强子序列细胞的基因表达调控作用。

1. 构建人乳腺珠蛋白（human mammaglobin，hMAM）启动子／增强子调控报告基因表达载体，探讨hMAM启动子／增强子序列在乳腺癌细胞中的特异性调控作用。方法应用PCR技术，从基因组DNA中扩增出hMAM启动子／增强子DNA序列，构建于PGL3报告基因上游，分别转染体外培养的乳腺癌细胞MDA—MB-415、T47D及胃癌细胞7901，分析启动子和增强子序列对乳腺癌细胞的基因表达调控作用。结果酶切图谱分析、DNA序列测定表明成功构建hMAM启动子／增强子调控的表达载体；荧光素酶报告基因检测结果分析表明，hMAM启动子／增强子能够调控报告基因的表达。结论hMAM启动子／增强子，在MDA—MB-415乳腺癌细胞具有调控基因表达的作用；
2. 利用前列腺特异性抗原 (pros—tate—specific antigen，PSA)组织特异性表达的特点，克隆 出其上游增强子 (prostate-specific anti—gen enhancer，PSAE)和启动子(prostate—specific antigen promoter，PSAP)片断，并对其表达效率和组织特异性表达进行初步研究。方法：从前列腺癌组织提取基因组 DNA，并采用PCR方法分别扩增 PSA 增强子和启动子序列；利用报告基因pEGFP一1，分别 构建含不同调控序列的表达载体 ；脂质体介导基因转染不同细胞并观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况。