BstL DNA 聚合酶

　　产品概述

　　BstLDNA聚合酶是在野生型BacillusstearothermophilusDNA聚合酶I大片段（BstDNA聚合酶大片段）的基础上，通过定向进化、理性设计、半理性设计等多轮分子改造进化而来，相比于野生型BstDNA聚合酶大片段，BstLDNA聚合酶显著提升了扩增速度、

　　产量、耐盐性和热稳定性等性能。BstLDNA聚合酶具有5´→3´的聚合酶活性和强链置换活性，但没有5´→3´核酸外切酶活性。使用本产品能够大幅度提升环介导等温扩增（LAMP）体系的性能。

　　注：BstLDNA聚合酶的贮存液为：10mMTris-HC（lpH7.1）,50mMKCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.1%TritonX-100,50%甘油。

　　应用

　　1）用于LAMP等温扩增体系检测靶标DNA；

　　2）与瀚海RTL逆转录酶产品联合使用，进行RT-LAMP等温扩增检测靶标RNA。

　　运输与保存方法

　　0℃以下运输，-20℃保存。避免反复冻融，产品有效期18个月。

　　活力定义

　　65℃,30min内使10nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定义为1个活性单位(U)。

　　质量控制

　　核酸内切酶残留检测：基于HHBstL反应缓冲液配制50μL反应体系，其中包含1μg的pUC19DNA和500U本酶，在37℃下孵育4小时，由琼脂糖凝胶电泳检测，pUC19DNA电泳条带没有明显变化。

　　核酸外切酶残留检测：基于HHBstL反应缓冲液配制50μL反应体系，其中包含1μg的Lambda-HindIIIDNA和500U的本酶，在37℃下孵育4小时，由琼脂糖凝胶电泳检测，电泳条带没有明显变化。

　　RNase残留检测：基于HHBstL反应缓冲液配制10μL反应体系，其中包含40ng的MS2RNA(3500nt)和8U本酶，在37℃下孵育16小时，由琼脂糖凝胶电泳检测，电泳条带没有明显变化。

　　大肠杆菌DNA残留检测：120U本酶中残留的核酸经E.coligDNA特异性的TaqManqPCR检测，E.coli基因组残留低于1拷贝。

　　实验流程

　　1）将10×HHBstLBuffer取出，冰上解冻，使用前涡旋10s混匀，并短暂离心。

　　2）除模板DNA外，其余组分按下表顺序配制反应混合液。

　　3）用移液器吹打混匀，并短暂离心。

　　4）60-65°C恒温孵育1h，观察扩增产物。

　　注意事项

　　1）10×HHBstLBuffer可以室温融化，融化后宜存放于冰盒内或冰浴上，使用完毕后应立即置于-20℃保存。

　　2）如果用本产品进行核酸检测，应当谨防扩增产物DNA造成的气溶胶污染，建议在PCR操作间中操作；扩增后的阳性样本不建议开盖，建议置于密闭塑料容器后丢弃。

　　3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。