柱式鼠尾DNAout

柱式鼠尾DNAout

产品及特点 大鼠和小鼠是重要的生命科学实验材料，鼠尾则是小鼠佳活体样品，常用于基因型的快速检测。本试剂盒采用独特的酶和缓冲体系，可以快速得高质量、高纯度的基因组 DNA。本产品具有下列特点：

1. 即开即用，不需要自己准备各种溶液。

2. 产量高，从 0.5g 鼠尾中可以提取到约 10 μg 的基因组 DNA。

3. DNA 纯度高，OD260/280 一般在 1.7-1.9，片段大一般在 20 kb 以上。

4. 可用于后续的酶切、PCR、Southern 杂交、文库构建等实验。

5. 本产品仅供科研使用。 
规格及成分 成 份 编 号 大纸盒包装 
柱式鼠尾 DNA 提取溶液 A 121102a 50 mL 蛋白酶 K 溶液（20 mg/mL） 80911 1 mL 柱式鼠尾 DNA 提取溶液 B 121102b 15 mL（棕色瓶） 柱式鼠尾 DNA 提取溶液 C 121102c 50 mL 离心吸附柱（15 层膜） 60911 50 套 通用洗柱液 60408 50 mL DNA 洗脱液 3.0 170603 10 mL 使用手册 121102sc 1 份

运输及保存 常温运输及保存（蛋白酶 K 溶液需要低温运输，-20℃保存），有效期一年

自备试剂 氯仿

1. 剪取 0.5-1cm 鼠尾（约 15-30mg），尽量剪短成的 1mm 左右小段，放入干净的 1.5 mL 塑料离心管中。若不需要立即使用，可以在液氮中或-80℃长期放置，或-80℃放置数天。如果是动物心，肝、肾、脾和肌肉等组织，则取 30mg左右并充分剪碎。

2. 加入 1 mL 柱式鼠尾 DNA 提取溶液 A 和 20 uL 蛋白酶 K 溶液（20 mg/mL），37℃保温 10 小时（一般过夜保温就可以）。也可以放置于 65℃金属浴或水浴中保温 2 小时，其间每间隔 10 分钟涡旋混匀一次（或用手指用力弹击离心管底部数次）以帮助鼠尾酶解。对于老年小鼠鼠尾，可以适当增加酶解时间到3-4 小时。如果有温控混合器使反应体系始终处于摇晃状态。，则效果更佳。

3. 加入 0.3 mL 的柱式鼠尾 DNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 的自备氯仿，振荡器上振荡 30 秒充分混匀。

4. 12,000 rpm 室温离心 3 分钟，小心将上清转移到新的 1.5 mL 塑料离心管中。

5. 在上清液中加入等体积的柱式鼠尾 DNA 提取溶液 C，上下颠倒 30 秒充分混匀。

6. 将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将 0.7-0.8 mL 混合液转移到离心吸附柱中，室温放置 2 分钟，12,000 rpm 室温 1 分钟，弃穿透液。再把剩余的一半上柱，重复此操作。

7. 将 0.7 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12,000 rpm 室温离心半分钟，弃穿透液。

8. 将 0.3 mL 通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12,000 rpm 离心半分钟（此步为第二次洗涤，一般可以省略）。

9. 空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。

10. 将离心吸附柱放置在一新的 1.5 mL 塑料离心管中，加入 30-50 uL DNA 洗脱液 2.0。

11. 12,000 rpm 离心 1 分钟，管底即为 DNA 溶液，可立即用于 PCR，也可长期保存在－20℃。