细胞凋亡形态学检测试剂盒

细胞凋亡形态学检测试剂盒

中文名称：细胞凋亡形态学检测试剂盒

英文名称：Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit

产品规格：100T

形态学检测是研究细胞凋亡的最基本方法。细胞凋亡的形态学变化是多阶段的，起初，细胞间连接和微绒毛消失，细胞体积缩小，胞浆凝缩，内质网变疏松并与胞膜融合，形成一个个空泡，核糖体与线粒体等细胞器聚集，结构尚无明显改变，细胞核内的染色质逐渐凝聚成新月状附在核膜周边，细胞核固缩呈均一的致密物，进而断裂成碎块，此时细胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不断出芽、脱落，一个细胞变成数个大小不等的有膜包裹的凋亡小体：最后凋亡小体被周围具有吞噬能力的细胞吞噬、消化。上述这些形态学的变化，可以通过本试剂盒中的染色及光学显微镜观察。

试剂盒组分：
Dye Reagent 1×10mL
Dye Reagent 2×1mL
Buffer A×10mL

注意事项：利用血球计数板进行该项操作时，不要用血计板配套的质地较硬的盖玻片，而用普通的盖玻片反而更利于结果的观察。

操作方法
1. 用适当的方法诱导细胞凋亡，消化收集细胞；
2. 用PBS 洗涤细胞二次，并调成浓度为1×106cells/ml 细胞悬液；
3. 吸取50~100μL 的细胞悬液均匀涂布于载玻片（A 片）上或用离心涂片机制片，室温晾干，甲醇固定5min；
4. 在A 片上滴加数滴100μL 的Dyes Reagent 1 室温染色1 min，用水轻轻洗去染液；
5. 在含体积分数为1%盐酸的80%乙醇中分化10 s，流水冲洗1 min，晾干，显微镜下观察细胞的形态。
6. 在另一张涂有细胞并已于无水乙醇固定2min 的载玻片（B 片）上滴加100μL 染色液2（Dyes Reagent2 ：Buffer A=1:9 的混合液），室温染色5～20min，用水轻轻洗去染液，室温晾干；
7. 二甲苯浸泡3 min，以去除杂质，使载玻片透明，最后树脂封片，显微镜下观察细胞形态；
8. 观察200-500 个细胞，计数凋亡细胞所占的比例。

结果分析A 片：凋亡细胞皱缩，胞膜完整。染色质凝聚，嗜碱性增强，染成深蓝色，呈环状或新月状附在核膜周围，或细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒，核膜消失。而坏死细胞体积增大，染色质变稀疏成网状，嗜碱性减低，染成淡蓝色，胞核破碎，细胞膜不完整。

B 片：凋亡细胞皱缩，胞膜完整。胞浆稀少或缺乏，染成淡红色，染色质凝聚，染成深紫色，细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒。

计算细胞凋亡率和死亡率：
细胞凋亡率=凋亡细胞/细胞总数×100%
细胞死亡率=坏死细胞/细胞总数×100%

储存：RT,避光，有效期12个月。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！