KOPN-8 人B淋巴细胞白血病细胞系

"KOPN-8 人B淋巴细胞白血病细胞系
细胞背景资料：B淋巴细胞白血病；女性 
细胞形态：淋巴母细胞样 
培养细胞的冻存及复苏：细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-１９６℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。【冻存细胞】１)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前１d换液；２)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达５×１０／ml左右密度，离心，去上清；３)加入配制好的冻存液(培养液６.８ml，小牛血清２ml，DMSO １ml，５.６%NaHCO３ ０.１ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂１０％二甲基亚砜(DMSO)或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；４)分装于无菌冻存管中，每管加１.５m悬液；５)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；６)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-１℃／min的速度，在３０～４０min时间内，下降到液氮表面，再停３０min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞】１)从罐中取出冻存管；２)迅速放入３６℃～３７℃水浴，不时摇动，使其急速融化，３０～６０s内完成；３)冻存管用７０％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加１０ml培养液；４)低速离心(５００～１０００r／min) ５min，去上清后再用培养液洗一次；５)用培养液适当稀释后，装入培养瓶３７℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到１０／ml，在融后稀释２０倍时，仍能保持５×１０／ml数量。 
细胞生长：悬浮 
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源 
KOPN-8 人B淋巴细胞白血病细胞系
细胞产品包装：复苏形式：T２５培养瓶(一瓶)或冻存形式：１ml冻存管(两支) 
公司细胞库冻存并保种有2300多种各类细胞系。针对每种不同的细胞系，公司摸索并积累了大量细胞培养条件和优化参数，为您的细胞实验保驾护航。细胞培养是生命科学研究中最基础、也是最常用的实验手段。从冻存→复苏→传代→实验，在每一次细胞培养的过程中我们都是精心呵护，小心培养，心里都是默默承诺：我要护你一世周全！可是可是……无数次细胞都因污染而离我而去，投入的不只是我们貌美如花的青春，还有那一去不复返的经费！在细胞生物学，生物化学，免疫学，神经生物学，病理学……只要涉及细胞的研究领域，都面临着支原体污染的威胁。在众多污染物中，也就属支原体最狡猾了，他最善于隐藏自己，因为被支原体污染的细胞不会马上死亡，但会改变细胞的新陈代谢，甚至会改变细胞的基因表达谱，我们就这样被欺骗了无数次，谁让我们就是个看“颜值”的花痴了。可是我们通过被虐了几百次的经验中总结出来，当你的细胞出现了这些症状时：生长速率改变；活性减弱；形态改变；染色体畸变；转染效率显著降低；细胞复苏后存活率降低……。那你就得千万小心了，也许你的细胞已经被支原体欺凌了！ 
细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。 
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外著名大学建系 
细胞生长特性：悬浮 
KOPN-8 人B淋巴细胞白血病细胞系
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好最至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：１)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗１-２遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。２)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）３)吸干净瓶内剩余液体，加入０.３ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净子弹头里备用，加入新培养基开始吹打，吹打２-３遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用２ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。４)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到最低，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW２６４.７，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。 
细胞形态特性：详见细胞说明书 
MESSA/Dx5细胞系相关产品：KM12-SM细胞、HLEC-B3细胞、MEG01细胞 
Hs 600.T细胞系相关产品：B 95.8细胞、SuDHL 1细胞、H1963细胞 
GP293细胞系相关产品：KU 812细胞、CL-11细胞、BMSC/hBMSCs细胞 
N9细胞系相关产品：KB细胞、KU-812-F细胞、HT144mel细胞 
S37细胞系相关产品：HBE135-E6E7细胞、Jurkat, Clone E6-1细胞、NCIH716细胞 
NCIH1993细胞系相关产品：3AA细胞、KPL4细胞、HUV-EC-C细胞 
GM03320细胞系相关产品：SK.OV.3细胞、675T细胞、L-02细胞 
Lu-99A细胞系相关产品：P3X63 Ag8细胞、HPAF II细胞、CHO K1细胞 
786-0WT细胞系相关产品：PATU-S细胞、BXPC3细胞、TW 01细胞 
F36P细胞系相关产品：MiaPaCa-2细胞、WM-266-4细胞、373MG细胞 
MMVECs细胞系相关产品：MFE 280细胞、MOLT16细胞、JIMT1细胞 
U-343-MG细胞系相关产品：OUMS-27细胞、CMT 93细胞、H1568细胞 
Line 697细胞系相关产品：HUT 226细胞、L-cells细胞、HeLa-S3细胞 
H2085细胞系相关产品：Epstein-Barr-1细胞、MC3T3, E1 subgroup-4 clone细胞、H1618细胞 
H-2066细胞系相关产品：OVCA433_Bast细胞、RKO-AS-45-1细胞、Panc 02细胞 
BAR-T细胞系相关产品：HEK-293F细胞、H22-H8D8细胞、CWR-22rv1细胞 
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ISHI细胞系相关产品：SF17细胞、MC-26细胞、NCI-SNU-387细胞 
KYSE0410细胞系相关产品：H929细胞、GTL-16细胞、SKG-IIIa细胞 
NCIH1793细胞系相关产品：D-324 Med细胞、GM04154B细胞、NCIH82细胞 
KOPN-8 人B淋巴细胞白血病细胞系
MHCC-97细胞系相关产品：U-343细胞、LL2细胞、PTK-1细胞 
A-172MG细胞系相关产品：HLEpiC细胞、SKG IIIa细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-361细胞 
FL62891细胞系相关产品：PCI-SG231细胞、SNU-601细胞、SNU-668细胞 
HITT15细胞系相关产品：CNE-1细胞、Lu-65细胞、HR-1细胞 
MEF细胞系相关产品：OKAC1细胞、SNT-8细胞、C8-D1A细胞 
PBL细胞系相关产品：H35细胞、RAW 264.7细胞、MA-782细胞 
C4-2 B细胞系相关产品：AR41P细胞、EB-3细胞、Panc-813细胞 
CCK81细胞系相关产品：HLE-B3细胞、IOSE29细胞、NCI H23细胞 
L-5178-Y细胞系相关产品：Clone 929细胞、MD Anderson-Metastatic Breast-330细胞、GM03569D细胞 
TK-1细胞系相关产品：TM3细胞、PC-3M细胞、GLC-15细胞 
Det. 562细胞系相关产品：H19-7细胞、SNU620细胞、MES 13细胞 
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C-33A细胞系相关产品：NCIH740细胞、CEM-T4细胞、PC3M-IE8细胞 
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KCL22细胞系相关产品：GC9811-P细胞、EC-GI细胞、Hs27F细胞 
P3-X63-Ag8细胞系相关产品：Colo-678细胞、Sp2/mIL-6细胞、HEY A8细胞 
UCLA SO M14细胞系相关产品：H-220细胞、CEF细胞、C2BBe 1细胞 
HRPEpiC细胞系相关产品：HDQ-P1细胞、RSC-364细胞、QBI-HEK 293A细胞 
SKNBE(2c)细胞系相关产品：Melan-a细胞、HCA 7细胞、NCI-H522细胞 
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MyLa 2059细胞系相关产品：B16 melanoma细胞、KYSE 520细胞、mRTEC细胞 
MB 157细胞系相关产品：UPCI:SCC090细胞、Z-138细胞、Hepatoma 22细胞 
NIE-115细胞系相关产品：MRASMC细胞、Hs852细胞、L5178Y细胞 
COLO 824细胞系相关产品：KY-270细胞、NP-69细胞、HEK293-EBNA细胞 
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KG-1a细胞系相关产品：HVSMC细胞、ROS17/28细胞、QG-56细胞 
P-388D1细胞系相关产品：OV1063细胞、L-Wnt3A细胞、Neuro 2a细胞 
TGBC11TKB细胞系相关产品：NCIH2085细胞、NCTC-3960细胞、OVCAR-433细胞 
NCI H226细胞系相关产品：Human Microvascular Endothelial Cell line-1细胞、HCC78细胞、BAR-T细胞 
Hs_578t细胞系相关产品：NOZC-1细胞、MILE SVEN 1细胞、NCIH1876细胞 
Sp2/O-Ag14细胞系相关产品：MUVEC细胞、SJ-RH30细胞、H-87细胞 
H250细胞系相关产品：VM-CUB1细胞、RERF-LC-MS细胞、NU-GC-2细胞 
HCC2935细胞系相关产品：GLC82细胞、L5178Y TK+/-3.7.2c细胞、OC-3-VGH细胞 
COS1细胞系相关产品：Pa14C细胞、H-1373细胞、YT细胞 
OEC33细胞系相关产品：ZR-75-1细胞、AZ521细胞、NBL-2细胞 
Hca-F细胞系相关产品：ARO81细胞、OCM-1A细胞、HCCLM6细胞 
GP2-293细胞系相关产品：AM38细胞、HEK-A细胞、CaES-17细胞 
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