实验之---植物RNA提取步骤

首次使用要加试剂：RNA wash buffer II 加48ml无水乙醇；RB buffer 每毫升加20μL2-mercaptoethanol (硫基乙醇)。
 
试剂使用顺序：RB—RWF wash Buffer –RNA wash Buffer II---DEPC/ddH2O2（65℃预热）；提前开水浴锅65℃
 
1、100mg植物材料液氮研磨，加入到1.5ml 离心管；

2、迅速加入500μL RB buffer，旋涡震荡至完全悬浮；

3、吸取液体过柱（gDNA 蓝），室温离心14000r，5min；（去除gDNA）

4、加入0.5倍体积的无水乙醇（约250μL）于过柱液体，吸打混匀；

5、吸取700μL过柱（RNA橙色），室温离心12000r，1min；

6、弃掉滤液，将剩余液体加入吸附柱，12000r，1min；      （可重复步骤5.6过柱一次  吸附RNA）

7、加入400μL RWF，10000r离心1min；

8、弃掉废液，加入500μL wash buffer II，10000 r离心30s；

9、弃掉废液，加入500μL wash buffer II，10000 r离心30s；

10、换新管，12000r空离2min；室温晾干（滤膜干了就行，不能太久，过干难洗脱），去除乙醇

11、将过滤柱转移至新1.5ml离心管，加入65℃预热的DEPC/ ddH2O2水50-100ul （分2次加，每次25ul洗脱RNA）；，室温2min；10000r离心2min

12、琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量，分光光度计检测浓度及OD值；RNA储存在-80℃。