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人解脲脲原体抗体(UU-AB)ELISA试剂盒的操作步骤

发布日期:2020/1/7 16:43:59

实验原理[1]

人解脲脲原体抗体(UU-AB)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人解脲脲原体抗体(UU-Ab)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人解脲脲原体抗体(UU-Ab)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样本处理及要求[1]

1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

操作步骤[1]

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;

3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。

4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

主要参考文献

[1] 赵季文 郑燕珊 徐翠瑜 汪宁 宋淑华 魏光秀 任桂珍 郭章溉 谢福晓。不同人群解脲脲原体和人型支原体抗体水平检测。《疾病监测》1993年 第2期。

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