二肽基肽酶8抗体的应用

背景^[1-3]

二肽基肽酶8抗体是将二肽基肽酶8作为抗原制备的可以特异性结合二肽基肽酶8的抗体蛋白。二肽基肽酶8抗体主要用于二肽基肽酶8的定性和定量实验。二肽基肽酶8能够裂解脯氨酰键处的肽底物。

二肽基肽酶8蛋白与二肽基肽酶IV具有相似之处，并且水解相同的底物。这些相似性表明，与二肽基肽酶IV一样，二肽基肽酶8蛋白可能在T细胞活化和免疫功能中起作用。二肽基肽酶8结构与DPPIV和FAP相似。

DPP8全长有882个残基，并且未糖基化，分子量大约100 kDa。DPP8单体有活性但主要的构象是同型二聚体。DPP8没有晶体结构，但已使用DPPIV，DPP6和FAP的已知结构建立了模型。DPP8模型有两个结构域：α/β水解酶域和β螺旋桨结构域。DPP8和DPPIV的氨基酸序列是27％相同，而DPP8和DPP9的氨基酸序列是57％相同。

应用^[4][5]

用于DPP8对宫颈癌细胞生物学行为的影响及相关机制

检测二肽基肽酶8(DPP8)在宫颈癌组织和细胞中的表达,评估DPP8蛋白表达水平与宫颈癌患者临床病理特征之间的关系,研究DPP8对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其可能的机制。

方法:采用免疫组织化学的方法检测宫颈癌组织中DPP8蛋白表达水平,评估DPP8蛋白表达水平与宫颈癌患者临床病理特征之间的关系。采用Western Blot和Real Time PCR方法检测两种宫颈癌细胞系和一种宫颈正常永生化细胞系中DPP8蛋白和mRNA表达水平。采用靶向DPP8基因的siRNA下调HeLa和SiHa细胞中DPP8基因的表达。采用靶向DPP8基因的pcDNA3.1-Flag上调HeLa和SiHa细胞中DPP8基因的表达。EDU测定HeLa和SiHa细胞增殖率。流式细胞PI单染法检测HeLa和SiHa细胞各个增殖时期细胞比例的变化。流式细胞Annexin V-FITC/PI双染法检测HeLa和SiHa细胞各个凋亡时期细胞比例的变化。Transwell小室法检测HeLa和SiHa细胞侵袭和迁移能力的改变。同时,Westem Blot和Real Time PCR方法检测Cyclin D1、BAX、Bcl-2、MMP2、MMP9的蛋白和mRNA的表达情况。

结果:与正常宫颈组织相比,宫颈癌组织中的DPP8蛋白表达明显增加。DPP8蛋白表达水平与宫颈癌患者的年龄、临床病理分型无明显相关性(P<0.05),但是DPP8蛋白表达水平与宫颈癌患者组织病理分级、FIGO分期、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05)。

下调DPP8表达后,HeLa和SiHa细胞的增殖能力减弱。下调DPP8表达后,处于增殖时期的HeLa和SiHa细胞比例明显减少,处于G1期的HeLa和SiHa细胞比例明显增多,处于S期和G2期的HeLa和SiHa细胞比例明显减少,处于早期凋亡时期的HeLa和SiHa细胞比例明显增多,侵袭和迁移到Transwell小室滤膜底层的HeLa和SiHa细胞数目显著减少(P<0.05)。上调DPP8表达时,处于增殖时期的SiHa细胞比例明显增多,处于G1期的HeLa和SiHa细胞比例明显减少,处于S期和G2期的HeLa和SiHa细胞比例明显增加,侵袭和迁移到Transwell小室滤膜底层的HeLa和SiHa细胞数目明显增多(P<0.05)。

DPP8还能调控HeLa和SiHa细胞中CyclinD1、Bc1-2、Bax、MMP2、MMP9的表达。DPP8表达下调时,CyclinD1、BAX、MMP2、MMP9蛋白和mRNA的表达量降低,BCL-2蛋白和mRNA表达量增高(P<0.05)。DPP8上调时CyclinD1、BAX、MMP2、MMP9蛋白和mRNA表达明显升高,BCL-2蛋白和mRNA表达量减少(P<0.05)。

参考文献

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