APROTININ抑肽酶的提取方法

概述^[1]

APROTININ抑肽酶又称为抑蛋白酶肽，是一种竞争性、可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂，可与丝氨酸蛋白酶形成稳定复合物并阻断酶的活性位点，抑制糜蛋白酶、胰蛋白酶、激肽释放酶和血纤维蛋白溶酶，不能抑制Xa因子和凝血酶。其具有广谱蛋白酶抑制作用，临床主要用于预防和治疗急性胰腺炎、纤维蛋白溶解所引起的出血、弥漫性血管内凝血，也用于抗休克治疗。腹腔手术后，直接注入腹腔可预防术后黏连。

应用^[1]

可抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、纤溶酶原的激活因子和纤溶酶，还有抑制血管舒缓素的作用。可用于防治胰腺炎和各种纤维蛋白溶解而引起的出血和预防术后肠粘连等。

药效学^[3]

本品是从牛胰脏提纯制成的一种能抑制肽酶的碱性多肽结晶，能抑制胰蛋白酶，阻止胰脏中其他活性蛋白酶原的激活及胰蛋白酶原的自身激活，能抑制纤维蛋白溶酶和纤维蛋白溶酶原的激活因子，阻止纤维蛋白溶酶原的活化;能抑制血管舒张素，从而抑制其舒张血管，增加毛细血管通透性，有降低血压的作用。

用法与用量^[3]

①第1、2天每日注射80000～120000U，首剂用量应大一些，缓慢静脉推注(每分钟不超过2ml)，维持剂量应采用静滴，一般每日4次，每日量20000～40000U;②对由纤维蛋白溶解引起的急性出血，立即静注80000～120000U，以后每2h静注10000U直至出血停止;③预防剂量，术前1d开始，每日注射20000U，共3d;④预防术后肠粘连，在手术切口闭合前腹腔内直接注入20000～40000U，注意勿与伤口接触。

提取方法^[4]

亲和双水相萃取体系的萃取条件为：萃取温度为25℃、萃取体系中萃取剂的浓度为12％(W/V)、(NH4)2SO4的浓度为15％(W/V)、pH值为7.0、搅拌萃取时间为30min、萃取体系中初始蛋白浓度为15mg/mL。此时蛋白质分配系数Kp达到0.28，Ke达24。

APROTININ抑肽酶的亲和双水相萃取工艺：取新鲜牛肺20Kg，经过硫酸酸解后(pH1.5)，进行板框过滤，滤液调整pH值为7.5后成为抑肽酶粗提液，用于亲和萃取。每次亲和萃取体系的的体积定为1L，平均每批产品约萃取50次，每批产品的处理量达到0.2亿KIU左右，平均萃取能力为40万KIU/次。亲和萃取后含抑肽酶的上相组分经过调整pH值至1.5-2.0后用截留分子量为10KD的超滤膜进行超滤后的滤出液过3KD的超滤膜进行超滤脱盐和浓缩。截留液重新用于亲和萃取的萃取剂。将上述中获得的浓缩液进行冷冻干燥获得高纯度APROTININ抑肽酶精品。

主要参考资料

[1]袖珍新特药手册

[2]新全实用兽药手册

[3]实用处方及非处方药物大全

[4][中国发明,中国发明授权]CN200410060667.7一种从牛肺中直接提取纯化抑肽酶的方法