2-二醇脱氢酶抗体的应用

背景^[1-3]

2-二醇脱氢酶（胆汁酸结合蛋白)抗体是可以特异性结合2-二醇脱氢酶的一类多克隆抗体免疫球蛋白。胆汁酸结合蛋白是参与胆汁酸重吸收的一种胞质蛋白,在胆汁酸的肝肠循环中发挥重要的作用。

回肠胆汁酸参与胆汁酸的重吸收,使肝肠循环中胆汁池增加.胆汁酸为胆固醇代谢的产物,胆固醇为血脂的主要组成部分,而高脂血症是导致动脉粥样硬化的重要因素。2-二醇脱氢酶抗体主要作为一抗用于ELISA，WB，IP等实验，ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

应用^[4][5]

用于非小细胞肺癌血清分泌蛋白标志物筛选研究

非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)是临床上最为常见的恶性肿瘤之一，寻找有效的肺癌诊断标志物一直是国内外研究的重要课题。癌细胞在发生、生长中可以分泌某些蛋白质进入血液，理论上讲，血清中肺癌细胞分泌蛋白可能伴随肺癌的发生而出现；且其血清浓度可能与肺癌细胞的异常增殖和／或其在癌细胞中的异常表达量密切相关。因此，肺癌细胞分泌蛋白是潜在的肺癌血清标志物，且对肺癌的早期筛选可能具有重要意义。

分泌蛋白二氢二醇脱氢酶(DDH)的Western blot验证以往的研究发现二氢二醇脱氢酶(DDH)是胞浆蛋白，且在肺癌组中有较高的表达，因此本研究选择DDH做进一步检测。A549细胞培养液上清蛋白及对照蛋白样品按分子克隆试验指南的方法进行：每孔上样量为50μg，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及转膜，蛋白转移至PVDF上，封闭，一抗(抗DDH抗体)孵育，洗涤，二抗温育，PBS洗涤，最后用ECL试剂发光及显影。对肺癌细胞分泌蛋白进行了研究，鉴定出A549细胞的分泌蛋白包括：α肌动蛋白、γ肌动蛋白，α烯醇酶(EN01)，锰—超氧化物歧化酶(MnSOD)，谷胱苷肽S转移酶P(GSTP1-1)，二氢二醇脱氢酶(DDH)，磷酸甘油酸变位酶(PGAM1)、葡萄糖依赖性胰岛素释放肽受体(GIPR)，肽基脯氨基顺反异构酶(PPIA)，磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)，蛋白基因产物9.5(PGP9.5)，Peroxiredoxin 1(PDX1)，Galectin-1等。

参考文献

[1]Prevalent Overexpression of Prolyl Isomerase Pin1 in Human Cancers[J].Lere Bao,Amy Kimzey,Guido Sauter,Janusz M.Sowadski,Kun Ping Lu,Da-Gong Wang.The American Journal of Pathology.2004(5)

[2]Profiling of the secreted proteins during 3T3-L1 adipocyte differentiation leads to the identification of novel adipokines[J].P.Wang,E.Mariman,J.Keijer,F.Bouwman,J.-P.Noben,J.Robben,J.Renes.Cellular and Molecular Life Sciences.2004(18)

[3]Prolyl isomerase Pin1 as a molecular target for cancer diagnostics and therapeutics[J].Kun Ping Lu.Cancer Cell.2003(3)

[4]A proteome study of secreted prostatic factors affecting osteoblastic activity:identification and characterisation of cyclophilin A[J].H Andersen,O.N Jensen,E.F Eriksen.European Journal of Cancer.2003(7)

[5]黄凌瑾.非小细胞肺癌血清分泌蛋白标志物筛选研究[D].中南大学,2007.