网站主页 交联葡聚糖凝胶G-75 新闻专题 葡聚糖凝胶G-75的应用

葡聚糖凝胶G-75的应用

发布日期:2020/4/7 11:42:19

背景及概述[1][2]

葡聚糖凝胶G-75呈白色微球状,多孔凝胶类型;结构成分:交联右旋糖酐;粒径: 40-120µm;工作PH值:2-10。葡聚糖凝胶G-75是一种分离试剂,层析介质。应用:利用分子筛作用,进行多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定。操作温度:4-40℃;球蛋白分离范围:3000-80000。

化学稳定性[2]

葡聚糖凝胶G-75不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。 它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的,在强酸中凝胶骨架的糖昔键被水解。 长期接触氧化剂将破坏凝胶,因而应避免使用。

物理稳定性[2]

葡聚糖凝胶G-75并不熔融,可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。 干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。

应用[1]

CN99116406.7公开了蕲蛇酶及其生产工艺,工艺为冻干蛇毒用已知的缓冲液溶解上葡聚糖凝胶G-75柱过滤,收集具有凝血酶样酶活力的A、B峰,用DEAE-葡聚糖凝胶A-50柱层析,收集具有凝血酶样酶活力的V、VI、VII峰,用CM-葡聚糖凝胶C-50柱层析,收集具有凝血酶样酶活力的CM1、CM2、CM3峰,用superdex75PG柱过滤,各得a,b两峰,收集具有高凝血酶样酶活力的b峰,混合为分子量24000~30000道尔顿及等电点4.5~5.0的蕲蛇酶。

使用方法[2]

1. 葡聚糖凝胶预处理:

在室温下,将葡聚糖凝胶干粉浸泡于蒸馏水中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,或者用热水浸泡(不建议煮沸)至少1小时直至充分溶胀,凝胶体积不再变化。

注:在溶胀前,加入蒸馏水搅拌后使其自然沉降,沉降后若上层溶液中漂浮的凝胶碎片颗粒较多,需要重复多次漂洗将其除去,防止层析时阻塞凝胶柱,影响流速。

2. 装柱:

将溶胀好的凝胶根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层; 装柱要均匀,可在凝胶耐受的操作压下装柱,装好的凝胶柱可以检测柱效,检测过滤柱装填是否合格。

凝胶层析分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度:分级分离时,一般需要 100cm 左右长的层析柱,柱高与直径之比为 20:1-100:1,柱高过高时,凝胶挤压变形阻塞会引起较大的反压,应当尽可能避免;分组分离(例如脱盐)时用短柱,柱高控制在40-50cm 以下,柱高与直径的比约为 5:1-10:1。

3. 平衡:

上样前用平衡液平衡层析柱至少3-5个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

4. 上样:

分级分离时上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积。

样品溶液如有杂质或沉淀应过滤或离心除去,样品的粘度不能过高,否则影响分离效果。

5. 洗脱方法:

可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱缓冲液中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;

6. 在位清洗(CIP)

凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。 方法是以40cm/h用1M氢氧化钠反向清洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。

7. 保存

凝胶柱暂时不用,可将其回收,一般方法是将凝胶用水冲洗干净滤干,可加入0.02%叠氮化钠防腐或用20%乙醇浸泡,以控制微生物生长。

主要参考资料

[1] CN99116406.7蕲蛇酶及其生产工艺

[2] 葡聚糖凝胶G-75产品介绍

分享 免责申明

交联葡聚糖凝胶G-75生产厂家及价格列表

葡聚糖凝胶G-75

¥询价

上海博湖生物科技有限公司

2023/05/04

欢迎您浏览更多关于交联葡聚糖凝胶G-75的相关新闻资讯信息