ATP酶2C2抗体的应用

背景^[1-3]

ATP酶2C2抗体是可以特异性结合ATP酶2C2的一类多克隆抗体。ATP酶2C2抗体是以源自人SPCA2的KLH共轭合成肽免疫无菌动物后在其血清中纯化制得的IgG。P型Ca2+转运ATP酶家族由三个亚科组成：肌浆膜（内质网）Ca2+ATPase（SERCA），质膜Ca2+ATPase（PMCA）和分泌途径Ca2+ATPase（SPCA）。SPCA1蛋白（由ATP2C1基因编码）是Ca2+/Mn2+-转运ATPase。它定位于高尔基体，并且与ATP酶2C2抗体SERCA2一起负责高尔基体腔中的离子环境。SPCA2（由ATP2C2基因编码）也位于高尔基体，并且比SPCA1具有更高的酶转化率，同时对胞质Ca2+具有高亲和力。人SPCA2酶ATP酶2C2抗体的酶学性质并将其组织表达限制在胃肠道和呼吸道，前列腺，甲状腺，唾液和乳腺，原则上可以定义在分泌细胞中具有特定生理作用的Ca2+-ATPase泵。

应用^[4][5]

用于β-catenin通过钠/钾ATP酶的α2亚单位调节骨骼肌细胞的静息膜电位研究

β-catenin胞浆蛋白是Wnt经典信号通路的一个重要下游分子,它在各系统组织中作用广泛β-catenin已经被证实在神经肌肉接头(neuromuscular junction,NMJ)形成中起着重要作用。而骨骼肌而并非突触前神经元的B-catenin在NMJ中作用尤为重要。获取HSA-β-cat-/-敲除小鼠,检测其和同窝对照小鼠骨骼肌细胞的电生理差异,并结合体外用靶向β-catenin的小片段干扰RNAs(β-catenin siRNAs)转染培养的小鼠成肌纤维细胞(C2C12)的方法进一步证实这种差异,从而来探讨骨骼肌β-catenin缺失后小鼠致死的可能原因和引起RMP去极化的可能机制,并进一步为β-catenin在NMJ发育中的作用研究提供补充证据和新的思路。

方法：

1.实验分组：1)HSA-B-cat-/-敲除PO小鼠组和同窝β-catloxp/loxpP0小鼠对照组,各4-6只；2)分别转染了β-catenin siRNA259sβ-catenin siRNA577、β-catenin siRNA1312的三组C2C12细胞作为实验组和转染了scrambled siRNA的C2C12细胞作为对照组；

2.实验方法：杂交小鼠获取敲除组和实验组小鼠,分别对各组小鼠膈肌、腓肠肌、趾长伸肌进行细胞内记录；转染C2C12细胞,对各组进行全细胞记录；Western blot法检测各组转染后C2C12细胞和各组小鼠肌肉中钠/钾ATP酶(Na,K-ATPase)a2亚单位(a2NKA)、Na,K-ATPase的a1亚单位(alNKA)、Kv3.4蛋白的表达；实时荧光定量逆转录-PCR检测两组小鼠肌肉中a2NKAmRNA的水平。

参考文献

[1]Activation of W nt5a‐R or2 signaling associated with epithelial‐to‐mesenchymal transition of tubular epithelial cells during renal fibrosis[J].Xin Li,Kaoru Yamagata,Michiru Nishita,Mitsuharu Endo,Nur Arfian,Yoshiyuki Rikitake,Noriaki Emoto,Ken‐ichi Hirata,Yoshiya Tanaka,Yasuhiro Minami.Genes Cells.2013(7)

[2]β-Catenin gain of function in muscles impairs neuromuscular junction formation[J].Haitao Wu,Yisheng Lu,Arnab Barik,Anish Joseph,Makoto Mark Taketo,Wen-Cheng Xiong,Lin Mei.Development.2012(13)

[3]Wnt/β-Catenin Signaling Regulates Telomerase in Stem Cells and Cancer Cells[J].Katrin Hoffmeyer,Angelo Raggioli,Stefan Rudloff,Roman Anton,Andreas Hierholzer,Ignacio Del Valle,Kerstin Hein,Riana Vogt,Rolf Kemler.Science.2012(6088)

[4]β-Catenin stabilization in skeletal muscles,but not in motor neurons,leads to aberrant motor innervation of the muscle during neuromuscular development in mice[J].Yun Liu,Yoshie Sugiura,Fenfen Wu,Wentao Mi,Makoto M.Taketo,Steve Cannon,Thomas Carroll,Weichun Lin.Developmental Biology.2012(2)

[5]赵聪颖.β-catenin通过钠/钾ATP酶的α2亚单位调节骨骼肌细胞的静息膜电位[D].浙江大学,2014.