葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)的原理和操作步骤

背景及概述^[1-2]

葡萄糖-6-磷酸酶是糖代谢中的重要酶类，能专一地催化6-磷酸葡萄糖及氨基-6-磷酸葡萄糖分解生成葡萄糖、氨基葡萄糖和无机磷。该酶主要分布于小肠、肝、肾组织细胞内质网的脂质中。正常人血清中该酶活性很弱，在Ⅰ型糖原累积病时肝内葡萄糖-6-磷酸酶活性降低或完全消失。血清葡萄糖-6-磷酸酶活性增高常见于肝炎、肝硬化、脂肪肝、肝癌等。血清葡萄糖-6-磷酸酶减低常见于Ⅰ型糖原累积病等。

葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)主要由孵育液、硝酸钴、硫化铵、等组成，酶活性部位呈棕色沉淀。葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)采用重金属捕捉剂和磷酸结合显示酶的活性。该酶对固定很敏感，组织经80%乙酸溶液固定后用石蜡包埋，G-6-Pase完全被抑制。

操作步骤^[2]

1、冰冻切片入蒸馏水清洗。

2、入葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)孵育液37℃孵育。

3、自来水冲洗后，蒸馏水冲洗。

4、在上述过程中配制ALP硫化工作液，即取试剂(B)用蒸馏水稀释50倍，即为ALP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液孵育。

5、自来水水洗。

6、(可选)入中性福尔马林固定。

7、入蒸馏水水洗2次。

8、甘油明胶封片。

9、染色结果：葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)活性处为棕色沉淀

注意事项^[2]

1、ALP硫化液易失效，分成小分储存，一经开启立即使用。

2、ALP硫化液具有腐蚀性和刺激性气味，应小心操作。

3、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

4、葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)适用于冰冻切片，一般不固定，也可染色后固定，固定步骤非必须步骤。

主要参考资料

[1] 临床肝病实验诊断学

[2] 葡萄糖-6-磷酸酶染色液(铅法)操作说明