维多利亚蓝胶原纤维染色液的配制和使用方法

背景及概述^[1]

维多利亚蓝胶原纤维染色液可用于胶原纤维和弹力纤维双重染色，重复性好，对比清晰，色彩鲜艳且不易褪色。

配制方法^[1]

维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200ml。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5分钟。然后用另一容器取30％三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中，继续煮沸3分钟，不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸一起放在60。Ｃ恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再将其溶于400ml的７0％乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g，放置至成熟后使用。

染色方法^[1]

（1）组织切片厚6um，脱蜡至水。

（2）将切片入70％乙醇中洗2min。

（3）直接浸入盛有维多利亚蓝液瓶中染0.5h。

（4）入95％乙醇中分色数秒钟。

（5）蒸馏水洗2min。

（6）用天狼星红饱和苦味酸液染切片15min。

（７）无水乙醇直接分化脱水。

（8）二甲苯透明，中性树胶封固。

结果^[1]

胶原纤维呈红色，弹力纤维成蓝绿色，红细胞及肌肉呈黄色。

注意事项^[1]

1、悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。

2、Formazan 的生成不仅与活细胞数成比例，也受作用时间的影响，因此当样品较多时测定的OD 值可能随时间而变。

3、MTT 溶液为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。MTT 溶液在4℃或较低温度情况下会凝固，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

主要参考资料

[1] 胶原纤维和弹力纤维双重染色方法的改进