亲核素Β1抗体的应用

背景^[1-3]

亲核素Β1抗体是可以特异性结合亲核素Β1的一类多克隆抗体，主要用于检测亲核素Β1的Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等多种免疫学实验。

检测原理：双抗体夹心法测定标本中亲核素Β1水平。用纯化的亲核素Β1抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入亲核素Β1，再与HRP标记的亲核素Β1抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的亲核素Β1呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中亲核素Β1浓度。

亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。

使用更多的是从链霉菌中提取的链亲和素（streptavidin）。生物素（biotin）又称维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素－羟基琥珀亚胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素化的产物。

亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大提高ELISA的敏感度。

应用^[4][5]

用于人类染色体13q32区域精神分裂症相关基因的遗传学研究

选择人类第13号染色体长臂三区二带（13q32）为精神分裂症易感基因候选区域，应用基于家系的连锁不平衡分析方法和基于群体的case-control相关分析方法在13q32染色体区域内筛检与精神分裂症相关联的基因位点。

以229个中国汉族精神分裂症患者及其健康父母双亲组成的核心家系为研究对象，利用生物信息学工具，通过数据库，确定13q32染色体区域内的48个已知基因，浏览每个基因上的SNPs。

在每个基因DNA序列上分析1～2个含有限制性内切酶酶切位点，杂合度大于10%的SNPs。选定13q32染色体区域内3个候选基因和2个EST上的7个SNPs，包括结合糖基磷脂酰肌醇的硫酸乙酰肝素蛋白多糖6基因（GPC6）的rs2892679、丝氨酸/苏氨酸激酶24基因（STK24）的rs1886089和亲核素β3基因（KPNB3）的rs626716、rs624066和rs2761072及LOC160889（EST位点）的rs2282135和LOC122330（EST位点）的rs942358。

长度横跨13139.81kb，在GPC6和LOC122330两个基因之间构建SNPs连锁不平衡图。用PCR-RFLP方法检测SNPs基因型，采用SPSS统计学软件管理和分析基因分型数据。用拟合优度卡方检验验证每个SNP基因型在抽样群体中的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。

用EH plus和UNPHASED软件分析两个SNPs之间的连锁不平衡程度。对于单位点的SNP数据，除进行单倍型相对风险（HRR）和传递不平衡（TDT）方法分析外，还要进行临床亚组分析。

参考文献

[1]Linkage Disequilibrium Mapping of Schizophrenia Susceptibility to the CAPON Region of Chromosome 1q22[J].Linda M.Brzustowicz,Jaime Simone,Paria Mohseni,Jared E.Hayter,Kathleen A.Hodgkinson,Eva W.C.Chow,Anne S.Bassett.The American Journal of Human Genetics.2004(5)

[2]Lesion Progression in apoE-Deficient Mice:Implication of Chemokines and Effect of the AT1 Angiotensin II Receptor Antagonist Irbesartan[J].Geneviève Martin,Frédérique Dol,Anne-Marie Marés,Vincent Berezowski,Bart Staels,Dean W.Hum,Paul Schaeffer,Jean-Marc Herbert.Journal of Cardiovascular Pharmacology.2004(2)

[3]Genes for schizophrenia?Recent findings and their pathophysiological implications[J].Paul J Harrison,Michael J Owen.The Lancet.2003(9355)

[4]Polymorphisms at the G72/G30 Gene Locus,on 13q33,Are Associated with Bipolar Disorder in Two Independent Pedigree Series*[J].Eiji Hattori,Chunyu Liu,Judith A.Badner,Tom I.Bonner,Susan L.Christian,Manjula Maheshwari,Sevilla D.Detera-Wadleigh,Richard A.Gibbs,Elliot S.Gershon.The American Journal of Human Genetics.2003(5)

[5]胡颖.人类染色体13q32区域精神分裂症相关基因的遗传学研究[D].吉林大学,2004.