抗体标记的应用

背景^[1-3]

抗体标记是通过不同的化学试剂交联到酶（辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶）、荧光染料（FITC、PE、APC等）、生物素（Biotin）、胶体金等。

酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。

酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。高质量的酶(如辣根过氧化物酶，简称HRP)国内已有商品供应。高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。在制备方法上，宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。

抗体经过酶标记、铁蛋白标记或通过胶体金标记获得标记抗体，是免疫电镜样品制备的一种方法，用于观察抗原抗体免疫复合物方面研究的手段。免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。

抗体标记主要是用于抗原的定位分析，在某些情况下，也可以对混杂有大量其他分子的样本中的抗原进行定量检测。由于抗体与其相应抗原具有很高的亲和力，因此带有易识别标记物的抗体可以定位分析抗原，并且是一种理想的快速价廉的定量测定方法。

应用^[4][5]

用于抗体的磁性微球制备和胶体金标记技术的应用研究

用牛乳源蛋白β-CN免疫大白兔制备得到抗血清，经盐析和层析纯化后得到兔抗β-CN IgG；对反相悬浮乳液包埋法制备磁性微球的条件进行了优化，对制备得到的微球进行醛基化和嗜硫修饰，并同未修饰微球一起进行了抗体吸附和抗原富集的性能比较，确定修饰方法。

用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，标记盐析IgG后用于金标垫的包被，检测垫经层析IgG和二抗包被后组装各部件得到β-CN胶体金免疫层析试纸条，对其灵敏性、特异性及稳定性进行测试，并用其对三种免疫磁性微球的抗原富集液进行定性检测。特异性多克隆抗体的制备。选取牛乳源蛋白β-CN做为抗原免疫大白兔，颈动脉取血后得到的抗血清用饱和硫酸铵分级盐析法（50%、40%、33%）粗分离抗体，用蛋白A亲和色谱柱对粗分离的抗体进行层析纯化。

考马斯亮蓝法测定盐析和层析样品的蛋白含量分别为2.42μg/ml和1.06μg/ml，其中层析样品经SDS-PAGE检测分析得抗体纯度达到95%以上，用间接ELISA法测定两者效价均为1:8000。壳聚糖/明胶磁性微球的制备。

采用反相悬浮乳液包埋法制备磁性微球并进行优化试验，确定方案为：水相为3%壳聚糖-2%明胶-1%磁性粒子；油相液体石蜡/乳化剂span-80为1:0.03；水油比为1:4;乳化时间8-10min；转速575r/min；固化交联剂25%戊二醛加入量为0.5ml/5ml水相样品；磁性微球洗涤顺序为石油醚、丙酮：水3:1、异丙醇。得到的磁性微球经SEM拍照观察粒径在3-8μm范围内，磁响应性良好。

参考文献

[1]A‘gold cluster-linked immunosorbent assay’:Optical near-field biosensor chip for the detection of allergenicβ-lactoglobulin in processed milk matrices[J].Verena Hohensinner,Irene Maier,Fritz Pittner.Journal of Biotechnology.2007(4)

[2]Preparation and characterization of chitosan–poly(acrylic acid)polymer magnetic microspheres[J].Yan Wu,Jia Guo,Wuli Yang,Changchun Wang,Shoukuan Fu.Polymer.2006(15)

[3]A reusable capacitive immunosensor with a novel immobilization procedure based on 1,6-hexanedithiol and nano-Au self-assembled layers[J].Jishan Li,Zhaisheng Wu,Hua Wang,Guoli Shen,Ruqin Yu.Sensors&Actuators:B.Chemical.2005(2)

[4]Colloidal gold-based immunochromatographic assay for detection of botulinum neurotoxin type B[J].Der-Jiang Chiao,Rong-Hwa Shyu,Chieh-Shen Hu,Hsien-Yuan Chiang,Shiao-Shek Tang.Journal of Chromatography B.2004(1)

[5]李韵.抗体的磁性微球制备和胶体金标记技术的应用研究[D].陕西科技大学,2013.