ANTI-HUMAN HGF的应用

背景^[1-3]

ANTI-HUMAN HGF是以ANTI-HUMAN HGF为抗原的免疫蛋白，可以特异性结合HUMAN HGF，主要用于检测HUMAN HGF的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物实验。

肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）最初bai作为一种肝du细胞有丝分裂原是从肝部分切除大鼠zhi的血清中dao分离得到的，随后相继从大鼠血小板、人血浆、兔血清中分离、纯化，其分子量为82～85kD，属不耐热多糖蛋白。HGF主要由间质细胞（如成纤维细胞、巨噬细胞等）产生，在鼠、兔、人等的多种组织中表达，调控细胞生长、分化。

其前体由728个氨基酸残基组成单链,经蛋白酶水解作用产生具有生物活性的异二聚体，成熟的HGF蛋白分子由α链（分子量为56～69kD）和β链（β1：34kD，β2：32kD）通过二硫键相连接，其中α链含有4个Kringle结构，与纤溶酶原具有38%的同源性。HGF基因约70kb，由18个外显子和17个内含子组成。人和鼠HGF cDNA序列高度保守，其生物学活性无明显种属差异。

HGF通过与特异性膜受体c-met结合而发挥其多样生物学作用，除促有丝分裂活性外，还作为一离散因子（scatter factor,SF）促进细胞扩散迁移,而且具有独特的形态发生原作用，诱导多种上皮细胞形成分支管状结构，包括肾小管上皮细胞。

HGF/c-met是发育过程中不可缺少的调控物，HGF基因敲除(gene knockout)或c-met基因突变均会引起个体发育的异常和表型的改变。许多研究证实，HGF/c-met在组织器官损伤后的再生时发挥重要作用。

肾脏是HGF受体c-met表达最高的器官之一，事实上不管是胚胎还是成年动物，HGF/c-met均参与肾脏多种生理病理过程的调节,包括肾脏发育、代偿性肾生长、急性损伤后肾小管的修复与再生等。

应用^[4][5]

用于GC-MSCs旁分泌HGF对胃癌生长作用及机制研究

胃癌间质干细胞(gastric cancer mesenchymal stem cells,GC-MSCs)能通过旁分泌作用促进胃癌进展,并且GC-MSCs较骨髓MSCs(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)高分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)。HGF已被发现在多种肿瘤中异常表达,且与肿瘤的增殖、转移及血管形成相关。因此本研究旨在探讨GC-MSCs来源的HGF在胃癌细胞增殖、迁移及肿瘤形成中的作用,以及对肿瘤细胞程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)表达的影响。

方法:采用组织贴壁法从胃癌患者肿瘤组织和健康人骨髓中原代分离培养GC-MSCs和BM-MSCs并收集其细胞培养上清(culture medium of GC-MSCs,GC-MSCs-CM,culture medium of BM-MSCs,BM-MSCs-CM),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测GC-MSCs-CM和BM-MSCs-CM中HGF水平。

利用HGF中和抗体中和上清中的HGF后作用于胃癌细胞株(SGC-7901和/或MGC-803),采用CCK8实验检测胃癌细胞增殖活性,克隆形成实验检测胃癌细胞克隆形成能力,Transwell和细胞划痕实验检测胃癌细胞迁移能力,Western-blotting检测胃癌细胞增殖和迁移相关蛋白表达水平,Western-blotting和流式细胞术检测胃癌细胞PD-L1表达水平。

为了在体内验证HGF对胃癌的影响,构建BALB/c裸鼠皮下成瘤模型,观察体内肿瘤形成情况,并通过Western-blotting检测肿瘤组织中PD-L1表达水平。用外源性HGF处理胃癌细胞,利用CCK8、流式细胞术及Western-blotting进一步证实HGF对胃癌细胞增殖及PD-L1表达的作用。

ELISA检测健康人及胃癌患者血清中HGF水平,Kmplot数据库分析HGF m RNA表达与胃癌患者总体生存率的关系,免疫组织化学染色(IHC)观察胃癌患者组织中HGF表达水平。结果:GC-MSCs-CM中的HGF含量明显高于BM-MSCs-CM(P<0.05)。

参考文献

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[3]HGF derived from cancer?associated fibroblasts promotes vascularizationin gastric cancer via PI3K/AKT and ERK1/2 signaling[J].Xusheng Ding,Wenqi Xi,Jun Ji,Qu Cai,Jinling Jiang,Min Shi,Yingyan Yu,Zhenggang Zhu,Jun Zhang.Oncology Reports.2018(2)

[4]Enhanced motility and proliferation by miR?10b/FUT8/p?AKT axis in breastcancer cells[J].Dong Guo,Jia Guo,Xiang Li,Feng Guan.Oncology Letters.2018(2)

[5]丛春晖.GC-MSCs旁分泌HGF对胃癌生长作用及机制研究[D].江苏大学,2019.