山羊抗猪IGG FC (HRP)的应用

背景^[1-3]

山羊抗猪IGG FC(HRP)可以特异性结合猪IGG FC的免疫抗体，主要用于检测猪IGG FC的Western blotting、Immunohistocry、ELISA、IF、IHC-P、IHC-F等生物实验。Fc段：可结晶段（fragment crystallizable，Fc）相当于Ig的CH2和CH3结构域，是Ig与效应分子或者细胞相互作用的部位。

免疫球蛋白G（IgG）是血清中免疫球蛋白主成分，约占血清中免疫球蛋白总含量的75%，正常dao值为9.5~12.5mg/ml。其中40～50%分布于血清中，其余分布在组织中。分子量约为150000道尔顿。人类血清中的IgG主要为单体，正常人的IgG包括四个亚型，其IgG1占60～70%，IgG2占15～20%，IgG3占5～10%，IgG4占1～7%。这些亚型在补体激活的经典途中结合能力各不相同。

IgG分子是血液中含量最多的糖蛋白，在正常人血液中，几乎所有Ig G的Fc都含有至少两个保守的N-糖基化位点。此外，在记忆B细胞快速合成大量抗体的过程中，编码轻链或者重链可变区的基因片段可能会通过体细胞超级突变的方式改变抗体可变区的氨基酸序列，该过程极有可能伴随Fab上N-糖基化位点的变化。

IgG活性决定IgG亚型和Fc段糖基化。四个人类IgG：IgG1-4，IgG1和IgG3与I型FcγRs具有高的亲和力。Fc段CH2结构域的Asp297双角N-连接寡糖复合物，对于Fc结构极为重要。糖基化调节Fc构象的稳定程度，细长影响Fc和1型及2型FcγR的结合。

应用^[4][5]

用于表面展示猪不同亚型IgG Fc的重组杆状病毒疫苗载体研究

表面展示猪IgG1 Fc可通过增强杆状病毒补体逃逸和转导哺乳动物细胞从而提高杆状病毒载体疫苗的效力。IgG Fc在体内主要通过转运途径(FcRn)、补体途径(C1q)和免疫细胞识别途径(FcγRI)来调控诱导免疫反应。考虑到猪不同亚型IgG Fc在结构上存在明显差异,在与上述三种途径识别受体的结合能力方面也存在差异。

通过尝试构建表面展示不同亚型IgG Fc的杆状病毒,探究不同亚型IgG Fc是否具有类似IgG1 Fc的功能,并筛选更具佐剂潜力的IgG Fc亚型,为构建高效的拮抗补体重组杆状病毒疫苗载体提供理论支持和技术手段。

结果:1.重组杆状病毒的构建和鉴定本试验基于MultiBac杆状病毒表达系统,通过在载体pFBDM-P10-gp64SP-vsvgED多克隆位点中插入不同亚型IgG Fc构建杆状病毒转移载体,经脂质体介导的方法转染Sf9昆虫细胞包装重组杆状病毒。Western blot和间接免疫荧光分析显示目的基因正确正确表达并定位在重组杆状病毒表面。这些结果表明,成功构建了8种展示不同亚型IgG Fc的VSV-G假型化的重组杆状病毒。

参考文献

[1]Fc fusion as a platform technology:potential for modulating immunogenicity[J].Ditza Levin,Basil Golding,Scott E.Strome,Zuben E.Sauna.Trends in Biotechnology.2015(1)

[2]Cell Susceptibility to Baculovirus Transduction and Echovirus Infection Is Modified by Protein Kinase C Phosphorylation and Vimentin Organization[J].Paula Turkki,Kaisa-Emilia Makkonen,Moona Huttunen,Johanna P.Laakkonen,Seppo Yl?-Herttuala,Kari J.Airenne,Varpu Marjom?ki.Journal of Virology.2013(17)

[3]Fc‐fusion proteins:new developments and future perspectives[J].Daniel M.Czajkowsky,Jun Hu,Zhifeng Shao,Richard J.Pleass.EMBO Mol Med.2012(10)

[4]The Fcγreceptor expression profile on porcine dendritic cells depends on the nature of the stimulus[J].Bert Devriendt,Bruno M.Goddeeris,Eric Cox.Veterinary Immunology and Immunopathology.2012

[5]刘泽辉.表面展示猪不同亚型IgG Fc的重组杆状病毒疫苗载体研究[D].西北农林科技大学,2017.