DMEM 不含酚红的应用

背景^[1-3]

DMEM不含酚红是在MEM培养基的基础上研制的，与MEM培养基相比，氨基酸的含量增加了2倍，维生素增加了4倍，同时还增加了非必须氨基酸、微量铁离子以及丙酮酸钠。DMEM培养基最初设计葡萄糖含量为1000mg/L（低糖型），后来又发展出葡萄糖含量为4500mg/L（高糖型），现已广泛应用于各种细胞的培养，不含葡萄糖的DMEM培养基可以根据研究需要，随意调节葡萄糖的浓度，方便快捷。

酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂，用以持续监测培养液的酸碱度，在低PH值时酚红使培养液呈黄色，而较高的PH值时使培养液呈紫色，PH值7.2～7.4时为红色，最适合细胞培养。但酚红也有一些缺点，研究表明酚红可以模拟固醇类激素（特别是雌激素）的作用，因此在用到雌激素敏感的细胞时（如乳腺组织），使用不含酚红的培养基。酚红会干扰流式细胞分析时候的检测。此外，一些无血清培养基的配方中若存在酚红会干扰钠-钾平衡。

L-谷氨酰胺（Glutamine）是细胞培养中所必需的一种营养元素，但其在溶液中不稳定，会自发降解，不含L-谷氨酰胺的培养基，可以根据研究需要任意调整L-谷氨酰胺的用量，在使用时添加新鲜的L-谷氨酰胺或其替代物更利于细胞的生长。

应用^[4][5]

用于富血小板纤维蛋白对牙周膜前体细胞成骨分化的影响及机制研究

以PRF+成骨诱导培养基和PRF+DMEM培养基为实验组培养条件，以成骨诱导培养基和普通DMEM培养基为对照组培养条件，观察不同培养条件对3种口腔前体细胞即PDLPCs、牙囊前体细胞（Dental Follicle Progenitor Cells，DFPCs）和牙槽骨前体细胞（Alveolar Bone Progenitor Cells，ABPCs）生物学行为的影响。

结果显示，在PRF与前体细胞的共培养中，PDLPCs呈放射状附着于PRF边缘，而DFPCs和ABPCs则与PRF边缘无附着。PDLPCs在PRF表面可以充分伸展，并伸出细小突起进入PRF纤维网络。

细胞迁移和增殖实验显示PRF对3种口腔前体细胞的迁移和增殖均有显著的呈剂量依赖性的促进作用（P<0.01），分别产生约9-24倍的迁移增加和约30-90%的增殖提高，其中对PDLPCs和DFPCs的作用最强，对ABPCs的作用相对较弱。

在细胞的成骨诱导实验中，可见成骨诱导培养基、PRF+成骨诱导培养基和PRF+DMEM均具有促进细胞成骨分化的作用，其中PRF+成骨诱导培养基的作用最强，其次为成骨诱导培养基，而PRF单独应用，也对ABPCs和PDLPCs产生了成骨诱导作用，但对DFPCs的作用很弱。

说明PRF对前体细胞的成骨诱导作用具有一定的细胞特异性。体内研究显示，在没有复合细胞的情况下，PRF会被机体新生的胶原组织在短时间内替代和降解。但是复合了PDLPCs后，复合物在体内经过21天并未完全消失，组织学染色见PRF结构消失，取而代之的是致密的结缔组织团块，其中的细胞排列规则，呈长梭形，类似于成纤维细胞。

但是，当PDLPCs/PRF复合物移植如动物颅骨缺损时，8周后缺损被新生组织完全封闭，且新生组织的μ-CT灰度与骨组织一致。VonKossa染色可见组织内存在大量矿化。

参考文献

[1]Platelet-Rich Fibrin Promotes Periodontal Regeneration and Enhances Alveolar Bone Augmentation[J].Qi Li,Shuang Pan,Smit J.Dangaria,Gokul Gopinathan,Antonia Kolokythas,Shunli Chu,Yajun Geng,Yanmin Zhou,Xianghong Luan,Brian L.Foster.BioMed Research International.2013

[2]A review on endogenous regenerative technology in periodontal regenerative medicine[J].Fa-Ming Chen,Jing Zhang,Min Zhang,Ying An,Fang Chen,Zhi-Fen Wu.Biomaterials.2010(31)

[3]Restoration of peri-implant defects in immediate implant installations by Choukroun platelet-rich fibrin and silk fibroin powder combination graft[J].Eun-Sik Jang,Jun-Woo Park,HaeYong Kweon,Kwang-Gill Lee,Seok-Woo Kang,Dong-Heon Baek,Je-Yong Choi,Seong-Gon Kim.Oral Surgery,Oral Medicine,Oral Pathology,Oral Radiology and Endodontology.2010(6)

[4]Mesenchymal stem cells rescue Purkinje cells and improve motor functions in a mouse model of cerebellar ataxia[J].Jonathan Jones,Jesús Jaramillo-Merchán,Carlos Bueno,Diego Pastor,MariCarmen Viso-León,Salvador Martínez.Neurobiology of Disease.2010(2)

[5]李琦.富血小板纤维蛋白对牙周膜前体细胞成骨分化的影响及机制研究[D].吉林大学,2013.