M199培养基的应用举例

背景及概述^[1]

M199培养基具有广泛的物种适用性，尤其适用于非转化细胞的培养。用M199来培养小鼠胰腺上皮细胞和大鼠晶状体组织细胞等细胞，通常都可以取得良好的实验效果。除用于细胞的体外培养以外，M199培养基还可以用于有关的病毒学研究以及疫苗生产。与其他基础培养基相比，M199培养基含有独特的成分，包括腺嘌呤、腺苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶和其他维生素。本品含有EBSS,不含蛋白质、脂类或生长因子，使用时通常需要添加10%胎牛血清（FBS）。M199使用碳酸氢钠缓冲系统（2.2 g/L），因此需要5%-10%的二氧化碳环境来维持生理pH值。M199可与EBSS一起用于二氧化碳培养箱，或与HBSS一起用于不含二氧化碳的培养箱。

应用^[2-3]

应用一、

CN201910459283.9公开了一种人脐静脉内皮原代分离培养方法，采集术后脐带，然后加入胶原酶分离提取脐静脉内皮细胞制成单细胞悬液，培养得到P0代细胞，使用基于M199培养基的完全培养基将P0代细胞培养至P2代细胞；采用胰蛋白酶对P2代细胞进行消化，接种于T75培养瓶中，采用基于M199培养基的完全培养基培养，待细胞融合度为80～90％时，得到扩增培养后的人脐静脉内皮细胞P3代细胞。本发明可保证细胞活力的同时将脐带储存时间延长至6小时。

应用二、

CN201410690907.5公开了一种人外周血间充质干细胞的培养方法以及应用。本发明所述培养方法先采集外周血，分离出血浆和外周血单个核细胞；将外周血单个核细胞用含所述血浆的M199培养基进行重悬，然后加入EGF因子培养3-5天；去掉未贴壁的悬浮细胞，更换前述添加了血浆和EGF因子的M199培养基继续培养；当细胞达到80%-90%融合时，消化细胞，获得培养后的PB-MSC。本发明将从外周血分离出的外周血单个核细胞以有别于传统方式的不同培养基进行有效培养，避免采用动员剂，保证了培养后的PB-MSC数量，同时提供了PB-MSC在抗皮肤衰老中的应用。

参考文献

[1] M199 培养基产品描述

[2] CN201910459283.9 一种人脐静脉内皮原代分离培养方法

[3] CN201410690907.5一种人外周血间充质干细胞的培养方法以及应用