HUTU-80 人十二指肠腺癌细胞的应用

背景^[1-3]

HUTU-80人十二指肠腺癌细胞分离自人十二指肠腺癌上皮细胞样贴壁细胞，主要用于人十二指肠腺癌细胞的细胞学实验。十二指肠腺癌指起源于十二指肠黏膜上皮的癌。多为单发，可由腺瘤恶变而来。组织学上可见腺瘤-腺癌转化及腺癌中的残存腺瘤组织。十二指肠腺癌多发生于降部乳头周围，约占60%，其次为壶腹下段，球部最少见。

本病早期症状一般不明显，可有上腹部疼痛、厌食、恶心、呕吐、贫血及黄疸等临床表现。十二指肠介于胃与空肠之间，十二指肠成人长度为20～25cm，管径4～5cm，紧贴腹后壁，是小肠中长度最短、管径、位置最深且最为固定的小肠段．胰管与胆总管均开口于十二指肠。因此，它既接受胃液，又接受胰液和胆汁的注入，所以十二指肠的消化功能十分重要。十二指肠腺癌又称“勃氏腺”。位于人和哺乳动物十二指肠粘膜下层内的腺体。人体中为粘液腺，分泌粘液、溶菌酶和０２３碳酸氢盐。分泌物呈碱性，它保护十二指肠粘膜免受胃液的侵蚀。

应用^[4][5]

用于蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞凋亡的比较蛋白质组学研究

蓖麻毒素是蓖麻籽中存在的一种能使核糖体失活的高效蛋白质,并由A、B链构成,A链是具有N-糖苷酶活性的活性链,导致蛋白质的合成受到抑制,引发细胞死亡；B链具有凝集素活性,能够识别和结合细胞表面含有半乳糖结构的受体,协助A链进入细胞。当一个蓖麻毒素分子进入到细胞内时,就可以使整个细胞的蛋白质合成停止最终导致细胞死亡。

通过比较蛋白质组学的研究手段,用蓖麻毒蛋白诱导人十二指肠腺癌细胞（HuTu-80）,分析全蛋白差异表达的情况,为蓖麻毒蛋白在HuTu-80细胞中的作用机理提供新的试验窗口。

1. 采用硫酸铵盐析法,从蓖麻种籽中提粗素,通过Sepharose4B柱亲和层析和Sephacryl S-200柱凝胶过滤层析对其进行纯化,经p-巯基乙醇处理,可见A链分子量为28KDa,B链的分子量为32KDa的蓖麻毒素。SDS-PAGE鉴定纯化后的蓖麻毒素达到了电泳纯。测定其浓度后,用获得的蓖麻毒蛋白对HuTu-80细胞进行ICso试验。结果表明：细胞形态发生变化,而IC50为200ng/ml。

2.构建蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞的凋亡模型,通过MTT排除试验、AO/EB染色、Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,确定蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞早期凋亡时相,提取细胞组分蛋白进行Western-blot分析,观察HuTu-80细胞在凋亡过程中细胞色素c的迁移情况。

参考文献

[1]iTRAQ‐coupled two‐dimensional liquid chromatography/tandem mass spectrometric analysis of protein profile in Escherichia coli incubated with human neutrophil peptide 1–potential in antimicrobial strategy[J].Yu SiZhou,MouadLamrani,Mary B.Chan‐Park,Susanna Su JanLeong,Matthew ChangWook,Wei NingChen.Rapid Commun.Mass Spectrom..2010(18)

[2]Taurine protects transformed rat retinal ganglion cells from hypoxia-induced apoptosis by preventing mitochondrial dysfunction[J].Ka Chen,Qianyong Zhang,Jian Wang,Fengjin Liu,Mantian Mi,Hongxia Xu,Fang Chen,Kaihong Zeng.Brain Research.2009

[3]Waltonitone induces human hepatocellular carcinoma cells apoptosis in vitro and in vivo[J].Zhang Zhang,Shuo Wang,Hong Qiu,Chaohui Duan,Kan Ding,Zhengtao Wang.Cancer Letters.2009(2)

[4]Quantitative Proteomic Analysis of Mitochondria in Aging PS-1 Transgenic Mice[J].You-Jun Fu,Shuling Xiong,Mark A.Lovell,Bert C.Lynn.Cellular and Molecular Neurobiology.2009(5)

[5]栾世慧.蓖麻毒蛋白诱导HuTu-80细胞凋亡的比较蛋白质组学研究[D].内蒙古民族大学,2012.