C127小鼠乳腺肿瘤细胞的应用

背景^[1-3]

C127小鼠乳腺肿瘤细胞是源自RIII小鼠乳癌的未经转化的克隆株。这些细胞的上清液没有逆转录酶活性。此细胞株常用于肉瘤病毒诱导的聚集呈现及牛刺瘤病毒的体外定量测试。最近常用作牛刺瘤病毒DNA质粒转化的合适受体。

C127(小鼠乳腺肿瘤细胞)操作流程：

1.细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。

2.如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。

3.贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（最高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。

4. 生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。

C127(小鼠乳腺肿瘤细胞)传代流程

1.吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加1~2 ml 0.25%EDTA的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在1~2min）。

2.镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。

3.取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养。

4.注意培养基PH值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。

应用^[4][5]

用于苯达莫司汀（Bendamustine）诱导小鼠乳腺癌细胞凋亡及其机制的研究

观察抗癌药物苯达莫司汀对体外培养的小鼠乳腺瘤细胞系C-127生长抑制及其作用机制，以期在细胞水平上为治疗乳腺癌提供相关的理论依据。

方法：细胞增殖检测方法：采用形态学观察和细胞记数法检测苯达莫司汀对C127细胞形态和存活率的影响；细胞凋亡检测方法：用吖啶橙染色法，在荧光显微镜下观察细胞核的形态变化和凋亡小体；TUNEL法检测DNA的片段化；

细胞凋亡和坏死的鉴别：检测乳酸脱氢酶（LDH）的释放区分坏死和凋亡；p53蛋白表达测定：免疫荧光结合激光共聚焦扫描显微技术测定细胞中p53的表达情况；细胞周期的变化：流式细胞术检测苯达莫司汀对C127细胞周期的影响。

结果：1．相差显微镜观察显示：苯达莫司汀20μg／ml作用C127细胞24h之后细胞形态无明显变化，48h后细胞表现出凋亡的特征，细胞突起变少，细胞中颗粒和空泡增加，细胞核明显增大。苯达莫司汀40μg／ml作用C127细胞24h，48h后细胞都表现出凋亡的特征，48h后可见少量的凋亡小体。

2．细胞计数表明：苯达莫司汀对C127的生长有明显抑制作用，并呈明显的剂量时间依赖性。

3．吖啶橙染色显示：苯达莫司汀可使C127细胞核内染色质凝集、核片段化以及出现凋亡小体。

4．TUNEL检测表明：药物处理后，C127细胞呈现DNA的片断化以及核片断化。

5．LDH活性检测显示：C127细胞采用苯达莫司汀20μg／ml处理48h后，与对照组相比培养液中LDH含量无明显差异（P＞0.05），苯达莫司汀40μg／ml处理48小时，与对照组相比培养液中LDH含量明显升高（P＜0.05）。

参考文献

[1]Cadmium-induced apoptosis in C6 glioma cells:Mediation by caspase 9-activation[J].Wim W?tjen,Monika Cox,Marta Biagioli,Detmar Beyersmann.BioMetals.2002(1)

[2]Cytotoxic efficacy of bendamustine in human leukemia and breast cancer cell lines[J].S.Konstantinov,A.Kostovski,M.Topashka-Ancheva,M.Genova,M.Berger.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.2002(5)

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[4]Bendamustine as salvage treatment in patients with advanced progressive breast cancer:a phase II study[J].K.H?ffken,Kh.Merkle,M.Sch?nfelder,G.Anger,M.Brandtner,K.Ridwelski,S.Seeber.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology.1998(11)

[5]孔芳.苯达莫司汀（Bendamustine）诱导小鼠乳腺癌细胞凋亡及其机制的研究[D].山东大学,2007.