大鼠芳香族L-氨基酸脱羧酶(AADC)ELISA试剂盒的原因

背景^[1-3]

大鼠芳香族L-氨基酸脱羧酶(AADC)ELISA试剂盒应用固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）检测样本中芳香族L-氨基酸脱羧酶(AADC)的含量。

已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色的深浅和样品中待测物质的浓度呈比例关系。

大鼠芳香族L-氨基酸脱羧酶(AADC)ELISA试剂盒

大鼠芳香族L-氨基酸脱羧酶(AADC)ELISA试剂盒操作步骤

1）使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2）根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7）每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8）取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

用于大鼠脊髓损伤后不同时间点AADC细胞产生5-HT的相关研究

通过研究SCI前后AADC细胞的分布以及SCI后不同时间段AADC细胞表达5-HT的特点,从而揭示AADC细胞在SCI后的作用,为进一步研究SCI后痉挛的发生机制奠定基础。

方法:健康雄性Wistar大鼠90只,体质量（200±20）g,适应性喂养1周后,将其中52只大鼠脊髓胸段T10-11节段完全离断1-3mm,保证脊髓横断干净以及脊髓背静脉完好无损后缝合肌肉层和皮肤层。

随机将大鼠分为正常对照组12只、脊髓损伤2d组24只（假手术2d组（Sham 2d组）12只,SCI 2d组12只）、SCI 5d组12只、SCI 15d组12只和脊髓损伤60d组24只（Sham 60d组12只,SCI 60d组12只）,另取正常大鼠、2d损伤大鼠和60d损伤大鼠各2只用于对照研究。术后对SCI大鼠进行护理以及人工辅助排尿,直到大鼠恢复自主排尿为止。

并且在术后不同时间点对SCI大鼠进行BBB评分,评分用来评价SCI大鼠后肢的运动功能。在手术后的相应时间点进行灌注取材,在灌注前30min给予外源性5-HTP。组织处理后将脊髓分为腰段（L1-L6）和骶尾段（S1-Ca3）切片。做对照研究的大鼠,不给予外源性5-HTP,其他方法操作同上。

使用免疫荧光法检测损伤段以下脊髓中AADC和5-HT的表达水平。实验数据采用均数±标准差（±s）表示,使用SPSS19.0软件进行统计分析,组间比较使用单因素方差分析,P<0.05差异有统计学意义。

结果:1.SCI后不同时间点对大鼠进行人工辅助排尿次数:在术后14d内,人工辅助排尿次数维持在1-3次/d,一般在术后15d以后大鼠基本恢复自主排尿,不再人工辅助排尿。

2. SCI大鼠在术后1-2d、3d、7d、14d、28d、60d,大鼠BBB评分别为0.00±0.00、1.00±0.58、3.30±0.95、6.30±0.10、7.50±0.36、7.87±0.08分。

3.在SCI前后AADC细胞的分布特点以及AADC细胞表达数量的变化:正常大鼠AADC细胞主要在脊髓的背角、中央带、中央管周围等部位表达,AADC细胞在SCI前后分布部位并没有发生明显改变。

参考文献

[1]Synthesis,transport,and metabolism of serotonin formed from exogenously applied 5-HTP afterspinal cord injury in rats.Li Y,Li L,Stephens MJ,Zenner D,Murray KC,Winship IR,Vavrek R,Baker GB,Fouad K,Bennett DJ.Journal of Neurophysiology.2014

[2]Descending 5-hydroxytryptamine raphe inputs repress the expression of serotonergic neurons and slow the maturation of inhibitory systems in mouse embryonic spinal cord.Branchereau Pascal,Chapron Jacqueline,Meyrand Pierre.The Journal of neuroscience:the official journal of the Society for Neuroscience.2002

[3]Production of dopamine by aromatic l-amino acid decarboxylase cells after spinal cord injury.Ren LQ,Wienecke J,Hultborn H,Zhang M.Journal of Neurotrauma.2016

[4]Treatment of Parkinson’s disease at present and in the future.Shigeki Kuzuhara.Rinsho Shinkeiga.2009

[5]张向.大鼠脊髓损伤后不同时间点AADC细胞产生5-HT的相关研究[D].承德医学院,2018.