动力-吲哚-尿素培养基基础(MIU)的应用

背景^[1-3]

动力-吲哚-尿素培养基基础(MIU)用于细菌的复合生化试验，成分(g/950ml)：胰酪蛋白胨10.0；磷酸氢二钾2.0；氯化钠5.0；琼脂4.0；酚红0.012；葡萄糖1.0；pH值7.0±0.1，25℃。

尿素酶试验原理：

有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适ph为7.0。

用法：称取本品2.2g,加热煮沸溶解于95ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟,冷至50℃左右时,无菌加入40%的尿素溶液5ml,混匀,分装试管备用。

动力-吲哚-尿素培养基基础(MIU)为含尿素、蛋白胨成分的半固体培养基，指示剂为酚红。具有色氨酸酶的细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚，加入吲哚试剂后，培养基与吲哚试剂的界面会变红；具有尿素酶的细菌能分解尿素产生氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。

动力-吲哚-尿素培养基基础(MIU)

将大肠埃希氏菌和普通变形杆菌穿刺接种于MIU培养基，35℃培养18h~24h，观察动力和尿素酶反应后，再滴加吲哚试剂。

实验结果：大肠埃希氏菌动力阳性，吲哚阳性，尿素酶阴性；普通变形杆菌动力阳性，吲哚阳性，尿素酶阳性。

应用^[4][5]

用于一种耐药变形杆菌的分离、鉴定及其免疫学效应的实验研究

选择乙肝病人外周血中树突细胞信号分子表达、细胞因子分泌，以及小鼠脾细胞增殖、脾细胞分泌细胞因子等体内外实验，探讨变形杆菌对树突细胞信号分子的表达和细胞免疫、体液免疫的影响，为变形杆菌应用于菌苗奠定了实验基础。目的本研究采用肠道菌选择培养基、鉴别培养基分离泌尿系统反复感染患者的尿液样本中的变形杆菌，经进一步鉴定和传代减毒后感染小鼠，分析脾细胞体外增殖能力和脾细胞分泌IL-2、IFN-γ水平及抗体变化；并通过流式细胞仪、酶联免疫斑点试验分析乙肝病人外周血树突细胞信号分子表达和IFN-γ水平变化，探讨变形杆菌对细胞免疫和体液免疫的影响，为变形杆菌菌苗研究奠定了实验基础。

方法1．留取泌尿系统反复感染患者的尿液样本，将所取样品用分区划线法分别接种于肠道菌选择培养基（S，S琼脂）及鉴别培养基（伊红美蓝琼脂）平皿中，置37℃温箱培养18～24小时后，观察菌落特征，在培养后的平皿中找到符合变形杆菌菌落特点的菌落。将挑出的菌落做进一步的鉴定。

2．用Blendon镀银染色后观察、三糖铁琼脂培养基试验、动力靛基质尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验对挑出的菌落作初步鉴定。

3．从泌尿系统反复感染患者的尿液样本中分离的变形杆菌通过特殊的处理，将原有的毒性减低，并做毒性试验以证明其毒性的降低。再用三糖铁琼脂培养基试验、动力靛基质尿素酶试验、苯丙氨酸脱氨酶试验、迁徙生长试验、硫化氢产生试验、液化明胶试验、西蒙枸橼酸盐试验、吲哚试验、氨基酸脱羧酶试验、糖（醇、苷）类发酵试验（麦芽糖、木糖）、对氯霉素的敏感性试验对特殊处理后的菌种进行最后鉴定。鉴定无误后将经特殊处理的菌种接种、培养、采集、杀菌、离心、纯化，稀释成2×1011／mL的原液，并对原液进行无菌试验和原液检定。

参考文献

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[2]The flavonoid ellagic acid from a medicinal herb inhibits host immune tolerance induced by the hepatitis B virus-e antigen[J].Eun Hwa Kang,Tae Young Kown,Goo Taeg Oh,Weung Feel Park,Sung-Il Park,Sung Kyu Park,Young Ik Lee.Antiviral Research.2006(2)

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[4]Hepatitis B virus‐induced defect of monocyte‐derived dendritic cells leads to impaired T helper type 1 response in vitro:mechanisms for viral immune escape[J].SusanneBeckebaum,Vito R.Cicinnati,XiaZhang,StanislavFerencik,AndreaFrilling,HansGrosse‐Wilde,Christoph ErichBroelsch,GuidoGerken.Immunology.2003(4)

[5]王鹏.一种耐药变形杆菌的分离、鉴定及其免疫学效应的实验研究[D].军医大学,2007.