竹红菌乙素的制备方法

背景及概述^[1]

竹红菌(hypocrella bambusae)系子囊菌纲肉座菌科竹寄生真菌，生长在海拔3000～3500m的高寒区箭竹上，主要产地为我国云南省和四川省。从竹红菌中提取出的竹红菌素(Hypocrellin)主要有竹红菌甲素(Hypocrellin A)和竹红菌乙素(Hypocrellin B)。

竹红菌是我国首先发现并用于治疗某些皮肤病的一种新型光疗药物。民间曾用于胃药和风湿关节炎。1980年万象义、陈远腾首次报道了一种新的光化学疗法药物——竹红菌中分离得到的竹红菌甲素，1981年陈维新等人确定了竹红菌甲素的化学结构。1985年万象义等人从竹红菌中分离得到竹红菌乙素，张曼华等人用光谱方法鉴定了竹红菌乙素的结构，梁丽等人用x-射线晶体衍射法确定了竹红菌乙素的结构。

目前竹红菌素已应用于临床治疗肥厚性瘢痕、皮肤淀粉样苔藓、牛皮藓、白癜疯等皮肤病。另外，竹红菌素还拥有优良的光动力性质，它与传统的光疗药物相比，拥有单线态氧量子产率高、能对癌变组织有选择性地吸附、易得和易纯化等优点，并且对癌细胞具有明显的抑制作用，从而引起国内外从事光动力疗法研究领域的研究工作者的重视。已有的研究结果表明，无论是从光敏活性，还是从光疗效果来比较，竹红菌乙素均要优于竹红菌甲素，竹红菌乙素是茈醌类光敏化台物，该类化台物具有许多优良的光敏性质，热稳定性好，并且能有效地杀死肿瘤细胞和抑制HIV病毒，因此近年来有关竹红菌素的研究绝大多数都是围绕竹红菌乙素来进行，这显示竹红菌乙素在光动力疗法领域中具有良好的应用前景。

制备^[1-2]

报道一、

(1)前期实验

准确称取5mg竹红菌甲素及1mg竹红菌乙素分别置100mL量瓶中，用乙醇定容，用超声分散至完全溶解，再逐级用乙醇稀释至所需浓度的标准溶液，将该两种标准溶液用高效液相色谱法检测得到竹红菌甲素标准品的保留时间在4.7min左右，竹红菌乙素标准品的保留时间在5.6min左右。并且将两种标准样品做紫外吸收检测，分别得到其标准图谱。

(2)原料的前处理

准确称取已干燥粉碎的竹红菌，加入乙醇，称重，于避光条件下在水浴中锁式回流反应。

(3)化合物的提取和分离

将乙醇回流样品旋转蒸干得粗提物，为暗红色粘稠状液体，粗提物加柱层析硅胶拌匀，湿法上柱，冲洗液按照不同的浓度梯度冲洗，分别得到紫红色结晶I和紫红色结晶II。

(4)产品的鉴定

将得到的紫红色结晶I和紫红色结晶II分别作紫外吸收检测，得到其产品图谱，并将该图谱与标准图谱相对照，即分别鉴定出竹红菌甲素和竹红菌乙素。

报道二、

（1）将中药材竹黄干燥、粉碎，装入提取容器内；

（2）用纯乙醇回流提取2次，合并提取液，回收乙醇并浓缩至适量；

（3）将浓缩液冷冻结晶出竹红菌乙素。

报道三、

高纯度竹红菌乙素按以下步骤提取：

1)粗提：取竹红菌药材1.0Kg，粉碎成粗粉，加5倍量95％乙醇热回流1小时，放冷至室温，倾出上清夜，药渣加乙醇重复回流提取2次，合并前后3次的乙醇提取溶液；

2)浓缩、自然结晶：将乙醇提取液分别转入蒸馏瓶中，减压回收乙醇至原体积的2/3，静置，使其自然结晶；

3)酸、碱处理：倾去母液，结晶尽量挥尽乙醇，结晶用20℃纯化水洗涤3次，尽量倾尽水液，将水不溶物溶入1000ml 0.5％氢氧化钠溶液中，并用氯仿萃取至有机相基本无色，收集有机相；水相中再加入与氢氧化钠溶液等浓度和等体积的盐酸溶液，摇匀，放冷；用氯仿萃取，直至水相变为茶色而有机相几乎无色，收集有机相；这样用酸碱处理重复萃取2次后，挥尽有机相；

4)结晶体用20℃的石油醚洗涤至石油醚溶液基本无色，真空干燥即得高纯度竹红菌乙素，纯度大于99％。

参考文献

[1] [中国发明] CN200910154644.5 一种新型光敏剂竹红菌乙素的制备方法

[2] [中国发明] CN201810733382.7 竹红菌乙素的制备方法

[3] [中国发明,中国发明授权] CN200610011071.7 高纯度竹红菌乙素的制备方法