人雌激素(E)ELISA试剂盒的应用

背景^[1-3]

人雌激素(E)ELISA试剂盒用于检测血液、血清、胸腹水等其他体液中人雌激素(E)的含量。

实验原理：人雌激素(E)ELISA试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人雌激素(E)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人雌激素(E)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

人雌激素(E)ELISA试剂盒

标本要求

1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

操作流程

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

应用^[4][5]

人雌激素(E)ELISA试剂盒用于探讨AIH术前血清E2值与术后10d、15d血清E2、β-hCG值与妊娠结局的关系

探讨AIH术前血清E2水平及分布情况与术后妊娠结局的关系,分析其临床意义。2探讨AIH术后10d、15d血清β-hCG、E2水平分布及变化与妊娠结局的相关性,以期为临床诊疗提供一定依据。

方法:随机选取AIH助孕并接受IUI治疗最终成功受孕的患者90例,其中,生化妊娠、早期流产、临床单胎妊娠各30例,对其资料进行回顾性分析。按照妊娠结局的不同分为3组:生化妊娠组(A组)、早期流产组(B组)、临床单胎妊娠组(C组),A组、B组患者可归为不良妊娠组(D组)。分别比较IUI前HCG注射日(或未注射HCG而自然破卵的为破卵日)血清E2以及IUI术后10d、15d血清β-hCG、E2的水平分布及变化,分析其与妊娠结局的关系。结果1 C组IUI前HCG日(或破卵日)的血清E2均值高于D组,差异有统计学意义(P<0.05)。

2 IUI术后10d、15d三组的血清β-hCG水平均值比较,均有显著性差异,术后10d:C组>(B组、A组),差异有统计学意义(P<0.05),而A组与B组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后15d:C组>B组>A组,均有显著性差异(P<0.05)。

3 IUI后15d各组的血清β-hCG值相较于10d均有上升趋势,C组的血清β-hCG呈快速增长趋势,而A组、B组则增长缓慢,具体变化幅度差异为:C组>B组>A组,均有统计学意义(P<0.05)。

4 IUI术后10d、15d C组的血清E2水平均值均高于D组,差异有统计学意义(P<0.05)。对比IUI术后10d与15d的血清E2值变化幅度,C组的血清E2值增长较快,而D组则增长较慢。

结论:1 IUI术前HCG日(或破卵日)临床单胎妊娠组的血清E2水平高于不良妊娠组,可能对术后妊娠结局的预测有参考意义。

2 IUI术后不同妊娠结局在同一时间(10d或15d)的血清β-hCG、E2水平分布各不相同,对临床预测早期妊娠结局具有参考价值。

3 IUI术后临床单胎妊娠组的血清β-hCG、E2值呈快速增长趋势,而不良妊娠组则增长缓慢,对临床应对措施与治疗方案的选择具有指导意义。

参考文献

[1][1]Empiric medical therapy with hormonal agents for idiopathic male infertility[J].Nicholas Tadros;;Edmund Sabanegh.Indian Journal of Urology,2017(3)

[2]Dydrogesterone support following assisted reproductive technique(ART)reduces the risk of pre-eclampsia[J].Anizah Bt Ali;;Mohd Faizal B.Ahmad;;Ng Beng Kwang;;Lim Pei Shan;;Nasir Mohamed Shafie;;Mohd Hashim Omar.Hormone Molecular Biology and Clinical Investigat,2016(3)

[3]The impact of progesterone supplementation on pregnancy rates after intrauterine insemination in patients developing a single follicle[J].Davut Güven;;Ali Bat?o?lu;;Seher Sari;;Kadir Bakay.Human Fertility,2016(2)

[4]Does progesterone supplementation improve pregnancy rates in clomiphene citrate and intrauterine insemination treatment cycles?[J].Sonia Elguero;;Allison Wyman;;William W.Hurd;;Nichole Barker;;Bansari Patel;;James H.Liu.Gynecological Endocrinology,2014(3)

[5]田宇.探讨AIH术前血清E2值与术后10d、15d血清E2、β-hCG值与妊娠结局的关系[D].内蒙古医科大学,2019.