仓鼠单克隆抗体制备

背景^[1-7]

仓鼠单克隆抗体制备基于成熟的仓鼠杂交瘤技术平台可以为客户提供全套的抗体相关技术服务，这些服务包括单克隆抗体的定制，抗体标记，抗体测序等。另外，可以为科研用户和工业界提供不同规模的抗体生产服务。也可以利用低免疫原性或者低纯度的抗原制备满足客户要求的特异性抗体。

杂交瘤技术的基本原理：

细胞融合是一个随机的物理过程。在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬中，经融合后细胞将以多种形式出现，如融合的脾细胞和瘤细胞、融合的脾细胞和脾细胞、融合的瘤细胞和瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在培养基中存活仅5～7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。

在细胞融合后，要从上述五种细胞中筛选出杂交瘤细胞，一般使用HAT培养进行筛选，HAT培养基中含有次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶(T)三种成分。细胞的DNA合成有内源性途径(主要途径)和外源性途径(旁路途径)两种方式。内源性途径就是利用谷氨酰胺或单磷酸尿苷酸在二氢叶酸还原酶的催化下来合成DNA；而外源性途径则是利用次黄嘌呤或胸腺嘧啶在次嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase,HGPRT)或胸腺嘧啶激酶(thymidine kinase,TK)的催化下来补救合成DNA，HAT培养基中氯基喋呤是二氢叶酸还原酶的抑制剂,能有效地阻断DNA合成的内源性途径。

B淋巴细胞具有HGPRTTK这两种酶,因此在内源性途径被阻断后仍能利用HAT培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶来合成DNA，可在HAT培养基中存活,但B淋巴细胞是正常细胞,故不能长期存活。杂交瘤技术中所使用和SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞为HGPRT-的TK-缺陷型,缺乏HGPRT酶和TK酶在内源性途径被阻断后不能进行DNA的外源性合成，故不能在HAT培养基中存活。

杂交瘤细胞由于继承了B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的双重特性，能够合成HGPRT酶和TK酶，故在HAT养基中能长期存活。因此将融合后的混合细胞在HAT培养基中培养两周后，只有杂交瘤细胞能存活下来，成为制造单克隆抗体的细胞源。

仓鼠杂交瘤技术的服务流程：

1.免疫原的准备。

序列分析和评价，多肽合成和偶联等。

2.动物免疫。

抗原免疫，可免疫2-3只仓鼠，ELISA方法检测血清抗体滴度。

3.细胞融合。

脾细胞与骨髓瘤细胞融合生产杂交瘤，筛选抗体分泌细胞，扩大培养并保存效果的细胞。

4.阳性细胞的亚克隆。

对客户指定的细胞进行亚克隆

5.抗体生产。

腹水或者细胞培养生产抗体。

应用^[8]

用于仓鼠单克隆抗体的科研相关研究：

例如在分泌型IgA嵌合抗体在中国仓鼠细胞中的表达研究中就需要构建分泌型IgA嵌合抗体仓鼠杂交瘤细胞。选择在中国仓鼠的卵巢(chinese hamster ovary, CHO)细胞中表达嵌合SIgA抗体,此嵌和抗体是抗H5N1病毒的具有中和活性的抗体,并且尝试了研究预防性分泌型IgA类抗体。

参考文献

[1]Antibodies and CD4+T-cells mediate cross-protection against H5N1 influenza virus infection in mice after vaccination with a low pathogenic H5N2 strain[J].Karoline Droebner,Emanuel Haasbach,Cordula Fuchs,Andreas O.Weinzierl,Stefan Stevanovic,Mathias Büttner,Oliver Planz.Vaccine.2008(52)

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[6]Recombinant expression of polymeric IgA:incorporation of J chain and secretory component of human origin[J].Eur.J.Immunol..2006(5)

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[8]王娟.分泌型IgA嵌合抗体在中国仓鼠细胞中的表达研究[D].陕西师范大学,2011.