禽类支原体通用PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

禽类支原体通用PCR试剂盒是一种用于检测禽类支原体的PCR试剂盒。禽类支原体是一种细菌，可以感染家禽和野生鸟类，引起呼吸道、消化道等疾病。

禽类支原体通用PCR试剂盒包含PCR反应体系、引物、荧光探针等成分，可以扩增出禽类支原体的DNA片段，并通过荧光信号检测来确定是否存在禽类支原体感染。

禽类支原体通用PCR试剂盒是一种专门用于检测禽类支原体的生物试剂盒。这种试剂盒使用PCR技术，通过特异性引物扩增禽类支原体的DNA片段，从而实现对禽类支原体的检测。

该试剂盒具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点，适用于对感染疾病的诊断。理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。试剂盒的引物经过精心优化，专一性强，只扩增禽类支原体，与其他微生物没有交叉反应。

禽类支原体通用PCR试剂盒

禽类支原体通用PCR试剂盒的使用方法一般包括以下步骤：

1.准备试剂和样品：按照试剂盒说明书准备所需的试剂和样品，包括DNA提取液、PCR反应液、特异性引物等。

2.样品处理：将待检样品进行处理，提取出其中的DNA。

3.配置反应体系：根据试剂盒说明书中的指示，配置PCR反应体系，包括PCR反应液、引物、DNA模板等。

4.设定PCR程序：根据试剂盒说明书中的指示，设定PCR程序，包括变性、退火、延伸等温度和时间。

5.运行PCR程序：将配置好的PCR反应体系放入PCR仪中，运行设定的PCR程序。

6.结果分析：在PCR程序运行结束后，对扩增产物进行电泳或其他方法检测，以判断是否扩增出特定基因片段，从而实现对禽类支原体的检测。

应用^[4-5]

禽类支原体通用PCR试剂盒可以用于禽滑液囊支原体qPCR及抗体免疫层析检测方法的建立

以MS为研究对象,建立了MS qPCR及MS抗体检测彩色微球试纸条的检测方法,为MS早期的临床诊断提供了有效的手段。

使用禽类支原体通用PCR试剂盒MS qPCR检测方法的建立。首先制备MS阳性标准品,将MS菌株复苏扩大培养后提取基因组DNA,测其浓度并根据公式计算拷贝数,为qPCR的阳性标准品。将基因组DNA稀释至1×107,再10倍梯度稀释,按照Gen Bank上MS WVU-1853株vlhA基因序列设计引物MS-F/MS-R,通过优化引物、探针浓度和退火温度,建立了TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线,并将所建立的荧光定量PCR方法进行特异性、敏感性、重复性试验。并用建立的荧光定量PCR方法对来自滨州多个养殖场临床疑似MS感染鸡只的咽拭子、关节液拭子及MS临床发病期间的种蛋进行检测,并与常规PCR方法进行比较。

结果显示,建立禽类支原体通用PCR试剂盒的标准曲线相关系数值(R2)为0.999,扩增效率(E%)为96.494,呈良好的线性关系。该方法最低检测限度为1×100copies/μL,比普通PCR高,表明其敏感性高;将MS基因组和临床上常见支原体病原体,如鸡毒支原体、猪肺炎支原体疫苗株RM48、猪鼻支原体、绵羊肺炎支原体、牛支原体的基因组作为模板进行扩增,仅MS有扩增,对其他病原基因组均无扩增,表明其特异性较强;以三个浓度的基因组DNA为模板,分别进行三次qPCR检测,每次扩增进行三次重复,其变异系数均小于3%,表明重复性良好。用本研究建立的qPCR法和普通PCR分别检测28份临床样品,结果显示qPCR阳性检出率为89.28%,普通PCR阳性检出率为27.27%,其敏感性明显高于常规PCR法。

实验结果显示,本研究禽类支原体通用PCR试剂盒建立的MS qPCR方法灵敏性、特异性、重复性好,为MS感染的早期诊断提供了一种快速定量检测方法。MS抗体检测彩色微球试纸条的研制。首先制备抗原,将培养好的MS浓缩、洗涤、破碎,取MS破碎的可溶性蛋白为致敏抗原与彩色纳米微球偶联,以三免MS的新西兰兔获得的抗体为质控抗体包被在质控线上,MS破碎的蛋白为标记抗原包被在检测线上,制备了MS抗体检测的彩色微球免疫层析试纸条。通过对检测条件的优化,特异性、敏感性、稳定性试验,建立了一种快速检测MS抗体的方法。特异性试验结果显示,用MS破碎蛋白致敏的微球仅与MS阳性血清反应产生条带,与禽其他常见病原体阳性血清未产生条带,表明其特异性强;敏感性试验结果显示,利用制备的彩色微球免疫层析试纸条对阳性血清连续10倍倍比稀释后检测,阳性血清10-3稀释度仍为阳性;稳定性试验结果显示,不同批次时间致敏的彩色微球于4℃保存与阳性血清反应均产生条带,稳定性好。

以上表明,本研究建立的MS抗体检测彩色微球试纸条具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为MS抗体检测提供了一种快速、简便、经济的检测方法。综上,本研究成功建立针对MS的禽类支原体通用PCR试剂盒qPCR检测方法,具有敏感性高、特异性强、重复性好等特点;成功建立MS抗体检测彩色微球试纸条检测方法,该方法具有敏感、特异、快速、便捷等特点。上述两种快速诊断方法,均可快速有效的检测鸡群中是否有MS的感染,为大量、快速检测MS病原、抗体提供了有效方法。

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