鸟苷酸的合成方法

发布日期:2023/12/8 9:26:18

简介

鸟苷酸亦称一磷酸鸟苷，简称GMP。是RNA的组成成分。碱解RNA得到的GMP是2-磷酸鸟苷和3-磷酸鸟苷的混合物。用稀酸水解GMP可生成鸟嘌呤、D-核酸和磷酸。用蛇毒磷酸二酯酶处理RNA生成5-磷酸鸟苷。在生物体内由次黄苷酸生成，此外也由鸟嘌呤或鸟苷生成。一般而言鸟苷酸平均含有7个分子结晶水，无臭，有特殊的香菇鲜味。易溶于水；微溶于乙醇；吸湿性强。在一般的食品加工条件下，对酸、碱、盐和热均稳定[1]。

合成

图1鸟苷酸的合成路线

方法一：含有大肠杆菌JM109/pEPI370的质粒pEPI370接种到50ml的L培养基中，在37°C下培养16小时后，通过离心从培养液中收集细胞，获得细菌细胞在水中的鸟苷晶体浆料和核苷浆料，以及研磨机（瑞士WAB制造的DYNO-MILL）进行晶体的粉碎。在目前的条件下，改变研磨时间等条件，获得了不同粒度的晶体。每单位重量的比表面积比为0.2m2/g，研磨后增加到0.4m2/g以上，在5’-鸟苷酸的下一步生产中，将焦磷酸29.3g和未研磨的鸟苷晶体或研磨晶体的浆液7.5g（鸟苷含量）在水溶液中混合，用氢氧化钠将pH调节至4.5，然后加入100mg上述物质制备，使最终体积调节至100ml，并且通过在30°C下进行40小时的反应来测量生成的5’-鸟苷酸的量。结果，当使用研磨晶体作为底物时，与使用未研磨晶体作为基质的情况相比，磷酸化反应进展良好，5’-鸟苷酸形成产率提高了不少于14%，磷酸产率提高了不少於1.4%。最终将上述溶液减压旋蒸然后通过高效制备液相纯化得到标题化合物鸟苷酸。合成路线如图1所示。

方法二：将21.5g（鸟苷含量）的酸性焦磷酸盐29.3g浆料、鸟苷的粉碎晶体（表面积比0.6m2/g）在水溶液中混合，并用烧碱将pH调节至约4.5。加入上述细菌细胞400mg或300mg，并调节至最终体积为100ml。并测量每0.5小时产生的5’-鸟苷酸的量。在水浴中进行反应，通过控制水浴的温度来控制反应温度，经过12h的反应，加水猝灭，然后通过硅胶柱色谱纯化得到标题化合物鸟苷酸。合成路线如图1所示[2]。