田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒的应用

背景^[1-3]

田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒是一种用于检测田鼠布鲁氏菌的分子生物学试剂盒。田鼠布鲁氏菌是一种可以感染人类和动物的细菌，引起布鲁氏病等疾病。

田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒包含以下主要成分：

PCR反应液：包括DNA聚合酶、dNTPs、引物等。

模板DNA提取液：用于提取样本中的DNA。

阳性对照品：含有田鼠布鲁氏菌特异性基因序列的DNA片段。

阴性对照品：不含有田鼠布鲁氏菌特异性基因序列的DNA片段。

田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒

田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒的操作步骤如下：

1.样本采集：从患者体内采集血液、粪便、组织等样本，并将其保存在无菌容器中。

2.DNA提取：将采集到的样本进行DNA提取，通常采用柱式或磁珠式DNA提取试剂盒。提取后的DNA应保存在-20°C或更低的温度下。

3.PCR反应体系准备：根据试剂盒说明书的要求，配制PCR反应体系，包括引物、荧光探针、dNTPs、DNA聚合酶等。

4.PCR反应：将提取的DNA加入到PCR反应体系中，进行PCR反应。反应条件和时间根据试剂盒说明书的要求进行设置。

5.结果分析：将PCR反应后的产物进行荧光信号检测，根据荧光信号的出现情况判断是否存在田鼠布鲁氏菌的感染。

田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒的优点是灵敏度高、特异性强，可以快速准确地检测出田鼠布鲁氏菌的存在。同时，该试剂盒操作简单，不需要复杂的设备和技术，适用于各种实验室条件。

应用^[4-5]

田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒可以用于中国布鲁氏菌分离株REP-PCR基因分型研究与应用

布鲁氏菌病也就是布鲁氏菌入侵机体而引发的传染病,包括在人和动物之间极易感染,不仅在中国乃至全球都流行的人畜共患病。据统计全国共有25个省市自治区都有布鲁氏菌病的分布,从1993年到2009年,布鲁氏菌病发病率上升了130倍,严重影响了畜牧业的发展,一个多世纪以来,该病一直被列为世界性五大兽疫之一。依据对宿主偏好性以及培养和生物学特性的不同,传统的基因分型方法已经将布鲁氏菌分为9个种19个亚型,包括羊种1、2、3亚型,牛种1、2、3、4、5、6、7、9亚型,猪种1、2、3、4、5亚型,犬种,沙林鼠种,绵羊附睾种,田鼠型,鳍型和鲸型。

本实验选取了来自我国26个省市自治区具有代表性的176株布鲁氏菌流行株,对菌株来源信息进行数据统计和分析；田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒REP-PCR基因分型方法需要先进行条件摸索,建立布鲁氏菌的REP-PCR分型技术；将已经建立好的基因分型方法应用于布鲁氏菌株鉴别,得出扩增图谱；将菌株来源分析结果结合田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒REP-PCR基因分型结果得出我国50年代到00年代之间布鲁氏菌病的疫情动向和流行规律,为我国提出合理的防控措施提供依据。从菌株来源分析得出我国布鲁氏菌50年代流行布鲁氏菌羊种3型和牛种1型,60年代流行布鲁氏菌羊种2型,70年代流行布鲁氏菌牛种6型,80年代流行犬种和牛种3型,90年代流行羊种1型,00年代以后流行羊种3型。

本实验对影响田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒REP-PCR反应的主要因素进行条件摸索,即模板、酶、引物和退火温度。模板选择采用试剂盒提取,在纯度和浓度上都能满足扩增的要求；rTaq酶用于REP扩增具有优势,后两种酶扩增不出全部的条带；引物浓度选择10μM：40℃扩增的结果条带是最清晰的,最终建立了布鲁氏菌田鼠布鲁氏菌PCR试剂盒REP-PCR分型方法。从布鲁氏菌株的聚类结果上看出牛种和羊种的亲缘关系很近,部分猪种1型和猪种3型和牛种的关系很近,但羊种和牛种的关系比猪种的关系更近,更具有密切联系。犬种和猪种、牛种的关系很近,它们之间存在着密切的关系。

参考文献

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