台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒的应用

背景^[1-3]

台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒是一种常用的细胞活性检测试剂盒，利用台盼蓝染色技术来检测细胞的存活状态。台盼蓝是一种能够透过死亡或受损细胞膜的染料，可以将死亡或受损细胞染成蓝色，而活细胞则不会被染色。通过染色后的细胞计数，可以计算出细胞的存活率。

台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒

台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒的使用方法一般包括以下几个步骤：

1.收集细胞样品并进行离心，去除上清液，用适量的细胞重悬液重悬细胞沉淀。

将等体积的台盼蓝染色液加入细胞悬液中，充分混匀后，染色一段时间（一般为3-5分钟）。

2.染色完成后，将细胞悬液在显微镜下直接计数或拍照后计数，记录染成蓝色的3.死亡或受损细胞数目和总细胞数目。

4.计算细胞存活率：细胞存活率=(总细胞数目-蓝色细胞数目)/总细胞数目×100%。

使用该试剂盒时，只需将待测样品加入到含有台盼蓝染料的反应体系中，经过一定的反应时间后，即可通过显微镜观察或流式细胞仪分析来判断细胞的存活情况。

台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒具有操作简便、结果准确可靠等优点，适用于各种类型的细胞存活率检测，包括肿瘤细胞、免疫细胞、干细胞等。

台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒的优点包括操作简便、快速、结果准确等。该试剂盒适用于各种类型的细胞，包括贴壁细胞、悬浮细胞等，常用于科研和药物筛选等领域。然而，由于台盼蓝染色的原理是基于细胞膜的完整性，因此对于一些细胞膜通透性增高的细胞或某些特定情况下，可能会出现假阳性的结果。此时需要结合其他检测方法进行判断。

应用^[4][5]

台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒可以用于线粒体功能障碍介导内质网应激在心肌缺血再灌注损伤中对心肌细胞的功能影响及机制研究

明确H/R过程中,心肌细胞收缩功能、细胞内[Ca2+]cyt浓度以及钙敏感性的变化并探讨可能存在的机制;(二)明确H/R过程中,线粒体结构和功能的改变情况并探究有效的保护方案;(三)明确H/R过程中,通过保护线粒体的结构和功能对ERS通路激活以及心肌细胞结构和功能影响并探讨可能存在的机制。

研究方法(一)原代分离成年大鼠心肌细胞H/R模型的构建研究采用Langendorff离体心脏灌流系统分离原代的成年大鼠心肌细胞,随机分为对照组(CTL组)和缺氧/复氧(H/R组),利用Mayo Clinic构建的气液混合瓶和流量控制泵系统,动态调控细胞培养皿所在腔室内气体和灌注液氧浓度。CTL组持续灌注37℃正常氧浓度含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca2+Tyrode溶液;H/R组首先在低氧环境中灌注37℃低氧浓度不含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca2+Tyrode溶液30 min,之后在正常氧浓度环境中恢复灌注37℃正常氧浓度含葡萄糖的1.8 mmol/L Ca2+Tyrode溶液120min,用来模拟心肌细胞H/R的过程。利用IonOptix系统、激光扫描共聚焦荧光显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)、免疫荧光法、氧浓度测定探针及台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒等,对原代分离的成年大鼠心肌细胞的纯度以及模型构建可靠性等进行研究和验证。

利用台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒台盼蓝染色、IonOptix系统、倒置相差显微镜、激光扫描共聚焦荧光显微镜(laser scanning confocal microscopy,LSCM)以及fura-2 AM荧光标记法等,观测存活心肌细胞的存活率以及形态学改变,同时动态监测候选细胞的收缩舒张功能以及细胞内的[Ca2+]cyt浓度变化,前者包括心肌细胞肌节静息长度(sarcomere resting length,SRL)、肌节收缩长度(sarcomere shortening length,SSL)、收缩速度和舒张速度等指标,后者包括[Ca2+]cyt浓度基础值、峰值、钙敏感性等指标,从而明确H/R过程中心肌细胞功能的改变。同时,利用免疫荧光法,测定H/R对存活的大鼠心肌细胞内总心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)及磷酸化cTnI(p-cTnI)的表达影响,探讨心肌细胞功能改变可能存在的分子生物学机制。

参考文献

[1]Lipid exchange at ER-mitochondria contact sites:a puzzle falling into place with quite a few pieces missing[J].Carmelina Petrungaro;;Benoît Kornmann.Current Opinion in Cell Biology,2019

[2]ER–mitochondria contacts:Actin dynamics at the ER control mitochondrial fission via calcium release[J].Janos Steffen;;Carla M.Koehler.The Journal of Cell Biology,2018(1)

[3]Regulation of Endoplasmic Reticulum-Mitochondria contacts by Parkin via Mfn2[J].Valentina Basso;;Elena Marchesan;;Caterina Peggion;;Joy Chakraborty;;Sophia von Stockum;;Marta Giacomello;;Denis Ottolini;;Valentina Debattisti;;Federico Caicci;;Elisabetta Tasca;;Valentina Pegoraro;;Corrado Angelini;;Angelo Antonini;;Alessandro Bertoli;;Marisa Brini;;Elena Ziviani.Pharmacological Research,2018

[4]Novel insights into the role of mitochondrial fusion and fission in cardiomyocyte apoptosis induced by ischemia/reperfusion[J].YuZhen Li;;XiuHua Liu.Journal of Cellular Physiology,2018(8)

[5]奚望.线粒体功能障碍介导内质网应激在心肌缺血再灌注损伤中对心肌细胞的功能影响及机制研究[D].中国人民解放军海军军医大学,2019.