CY5-NHS酯在多肽标记中的应用

CY5-NHS酯，英文名为Sulfo-Cyanine5 NHS ester，它是一种用于标记肽，蛋白质，寡核苷酸的氨基基团的花菁染料，具有较好的水溶性并且可溶于二甲基亚砜等强极性有机溶剂。CY5-NHS酯常被应用于生物分子标记，荧光成像及其他荧光生物分析，在生物化学基础研究中应用较多。

图1 CY5-NHS酯的化学结构式

基本介绍

CY5-NHS酯是一种蛋白标记荧光磺化染料，它的激发波长为646 nm，发射波长为664 nm，这一特性使其在红光区域有较好的荧光表现，有利于在生物样品中减少背景干扰。花菁染料有两种，一种是磺化染料，一种是非磺化染料。磺化的花菁染料是水溶性的，它们在水性环境中不需要使用有机助溶剂即可进行标记。非磺化的花菁染料需要借助有机溶剂（比如DMSO）才能在水性环境中溶解后进行标记。非磺化的花菁染料的荧光性质对溶剂和周围环境的依赖性很小。

标记多肽

将1.0 mgCY5-NHS酯溶解于400 μL DMSO后,加入到盛有多肽(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate ( 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液中。(染料CY5-NHS酯和多肽投料比是 1:1)。然后往上述混合液中加入15 μL三乙胺，常温避光搅拌反应混合物过夜。反应结束后用HPLC 纯化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上样注入2×400 μL，30分钟梯度洗脱。洗脱方法为：从0.1% 三氟乙酸水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30，流速4mL /min。(对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相)收集适当的色带峰，标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光储存;必要时可用质谱表征。[1]

稳定性

CY5-NHS酯对强光照射和热源较为敏感，因此在使用过程中需要避免过度的光照和高温。通常建议将其进行密封保存并置于较低的温度环境（-20度冰箱中）以确保其稳定性和长期保存的可行性。

参考文献

[1] Di Shen, Haojie Yu, et al, ACS Applied Materials & Interfaces 2023 15 (26), 31330-31343.