重组人C反应蛋白（CRP）的应用

背景及概述^[1]

C反应蛋白（CRP）是目前发现的重要急性时相反应蛋白之一。其作为灵敏的炎症指标、良好的心血管疾病发病诊断及其发病风险预测指标，对于许多疾病的筛查、监测以及疗效评估具有重要价值。目前商品化的CRP及其检测试剂多依赖进口，价格昂贵，阻碍了其临床研究与应用。传统获得人CRP的方法主要是从患者血清或腹水中直接分离纯化得到。由于人血清或腹水成分复杂，故纯化时难度大、操作复杂，而且材料来源困难，产量低。随着生命科学的不断发展，通过基因重组技术生产医用蛋白是当今生物及医学研究的热点。目前，国内外利用基因工程的方法获得重组人CRP的研究已有报道，但都存在一定的弊端，因此，有研究旨在探索利用真核甲醇酵母表达系统分泌表达并制备具有免疫反应性的重组人C反应蛋白（CRP），为进一步的rhCRP基础研究及CRP检测试剂的自主研制提供重要的实验材料和实验基础。

应用^[2]

近年来重组人C反应蛋白（CRP）的促炎症和致动脉粥样硬化的作用已被广泛研究并证实。重组人C反应蛋白（CRP）可诱导单核细胞趋化因子、细胞黏附分子、纤溶酶原激活抑制物1产生，降低内皮细胞一氧化氮的表达及其生物活性，减少前列腺素合成，增加内皮素1、白介素6、白介素8的释放，从而诱导内皮细胞的功能障碍和活化。

有研究认为重组人C反应蛋白（CRP）通过Fcγ受体Ⅱ和细胞外信号调控激酶(ERK)途径刺激U937细胞基质金属蛋白酶1 (MMP-1) mRNA的表达和蛋白质的合成，促进斑块破裂。最近研究发现CRP通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导途径刺激内皮细胞表达MMP-1，MMP-10。另外有研究将CRP与脐静脉内皮细胞共同孵育，发现随着内皮细胞表达CD40及配体CD40L的增多，细胞培养上清液中明胶酶A即MMP-2的活性有明显增高的趋势，并认为CRP通过CD40-CD40L信号途径介导内皮细胞表达明胶酶活性增高。

有实验在转录及蛋白水平上观察CRP对HUVEC表达MMP-2的影响，发现CRP呈时间、浓度依赖性上调HUVEC的MMP-2表达。正常人血清CRP水平低于0.2mg/L，而在不稳定型心绞痛患者血清CRP水平一般>3mg/L。研究也发现AS斑块内的CRP浓度可能远高于血浆中测定水平近10倍，因此局部AS损伤处CRP水平足以刺激内皮细胞分泌更多的MMPS。

实验中在5mg/L到50mg/L间采用了4个浓度点，大致与冠心病患者体内的血清CRP水平相符，同时也观察了同一浓度CRP对内皮细胞MMP-2表达的时间效应，结果显示脐静脉内皮细胞表达MMP-2随浓度和时间依赖性增高。有些研究认为体外实验中CRP诱导内皮细胞的炎症改变归因于CRP不纯，即制品中叠氮钠的作用。在实验中加入了叠氮钠组对照，结果显示0.0025%叠氮钠(50mg/LCRP中叠氮钠含量)对MMP-2蛋白和基因的表达几无影响，证明实验中CRP对脐静脉内皮细胞的作用并非叠氮钠所致。

主要参考资料

[1] 重组人C反应蛋白在甲醇酵母中的分泌表达及鉴定

[2] 重组C 反应蛋白促进脐静脉内皮细胞表达基质金属蛋白酶2