荧光定量PCR（qPCR）检测服务（含内参）的应用

服务概述^[1][2]     

实时荧光定量PCR（Real Time PCR）技术，是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR的荧光检出方法包括SYBR green（荧光染料掺入法） 和Taqman probe （探针法）两种方法。是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。荧光定量PCR的荧光检出方法包括SYBR green（荧光染料掺入法） 和Taqman probe （探针法）两种方法。

应用^[2]

1.从动物细胞、人或动物组织等样品中提取核酸；

2.对核酸进行浓度及纯度分析；

3.荧光定量PCR检测；

（1）引物和探针的设计与合成；

（2）绝对定量和相对定量的选择；

（3）探针法和染料法的选择；

（4）荧光定量PCR仪对目的基因的检测；

（5）数据统计和分析；

4.预实验服务：根据客户提供的目的基因序列或NCBI序列号提供客户引物和探针，并筛选出化的引物和探针；

5.正式实验服务：根据预实验筛选的引物和探针对所用样品进行荧光定量PCR的检测，并对结果进行统计和分析。

样品要求^[2]

细胞＞1×10⁶个；组织＞50mg；细菌湿重＞50mg

客户需提供^[2]

1.请提供新鲜材料或直接提供已纯化的DNA/RNA，确保总量>5μg/样品。如果目的基因表达量较低时，应尽量提供更高浓度的总RNA或DNA；

2.请提供已知的全长基因序列（GeneBank Accession Number、Gene ID）；

3.请提供尽可能详细的背景资料：生物物种信息（Human、Mouse、Rat等）、DNA/RNA来源、丰度等；

4.客户可以提供引物，没有引物的情况下，供应商帮助设计合成。

供应商提供^[2]

1.RNA抽提和PCR扩增电泳结果的数码拍照，定量PCR实验结果原始文件及相关软件；

2.提供实验报告，包括实验方法、步骤、所用试剂、仪器、数码照片及相关分析数据等，如有必要可以协助客户进行相关的数据处理和分析。

参考文献

[1] 临床肝病实验诊断学

[2] 荧光定量PCR（qPCR）检测服务（含内参）技术说明书