RIPA裂解液(强)的应用

背景^[1-3]

RIPA裂解液(强)是一种经典的细胞组织快速裂解液，主要用于从细胞中提取总蛋白。它含有多种成分，如Triton、SDS、NP-40等，这些成分能够有效裂解细胞并释放其中的蛋白质。

RIPA裂解液（强）的裂解强度大于NP-40裂解液和中强度的RIPA裂解液，因此它可以更有效地从细胞中提取蛋白质。所获得的蛋白质可用于多种下游实验，如Western Blot、免疫沉淀（Immunoprecipitation,IP）等。

具体来说，RIPA裂解液（强）的主要成分包括50mM Tris（pH 7.4）、150mM NaCl、1%Triton X-100、1%sodium deoxycholate、0.1%SDS，以及sodium orthovanadate、sodium fluoride、EDTA、leupeptin等多种抑制剂。这些抑制剂可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用，从而确保提取的蛋白质的质量和稳定性。

RIPA裂解液(强)

由于RIPA裂解液（强）含有较高浓度的去垢剂，因此不能使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。此外，这种裂解液不仅适用于动物和植物的细胞或组织样品，还可以用于真菌或细菌样品。

在使用RIPA裂解液（强）时，建议遵循产品说明书或相关实验指南进行操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。同时，实验过程中也应注意安全操作，避免交叉污染和其他安全问题。

应用^[4-5]

RIPA裂解液(强)可以用于CTP-FoxM1抗原负载的DC疫苗对小鼠FoxM1阳性肝癌皮下模型的免疫治疗效应

体外培养Hepa1-6小鼠肝癌细胞株,了解FoxM1作为肿瘤抗原在该细胞株中蛋白的表达水平,探讨Hepa1-6细胞用于小鼠Fox M1阳性肝癌皮下模型建立的可能性;摸索Hepa1-6细胞建立C57BL/6小鼠FoxM1阳性皮下肝癌的最佳条件;并探讨CTP-FoxM1负载的DC疫苗对小鼠FoxM1阳性皮下肝癌的免疫治疗作用。

方法:在37℃、5%CO2孵箱中,采用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养基(1%青链霉素)培养小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,收集对数生长期Hepa1-6肝癌细胞,RIPA裂解液(强)提取Hepa1-6细胞总蛋白,western blot方法鉴定FoxM1在小鼠肝癌细胞系Hepa1-6中的表达水平。于C57BL/6小鼠右胁腹皮下注射浓度分别5x106/ml、1x107/ml、3x107/ml的Hepa1-6细胞0.1ml,观察小鼠皮下肿瘤生长情况并每两天测量瘤体体积,绘制皮下肝癌的生长曲线,摸索小鼠皮下成瘤的最适条件;HE染色鉴定皮下肿瘤组织,同时Western blot检测肿瘤组织中FoxM1的表达情况。以浓度为1ug/ml的融合蛋白CTP-FoxM1转导DC48h制成疫苗,注射于荷瘤小鼠左胁腹皮下,测量并记录小鼠皮下肝癌瘤体的变化情况,病理检查确定肿瘤在肺、肝、脾等脏器的转移情况,ELISA试剂盒检测小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2的分泌水平,最终评估ctp-foxm1负载的dc疫苗对小鼠皮下肝癌的免疫治疗效应。此外,我们还采用elisa方法检测了78例phc患者血清中cxcl13的表达情况,回顾性分析患者临床病理特征和实验室检查指标并探讨cxcl13在肝癌中临床意义。

结果:hepa1-6小鼠肝癌细胞中高表达foxm1,可以用来建立foxm1阳性小鼠皮下肝癌模型。以3x107/ml浓度的hepa1-6细胞0.1ml荷瘤c57bl/6小鼠,建模时间短、成功率较高,he染色多见病理性核分裂,肿瘤内微血管丰富,与临床hcc类似,为观察后续dc疫苗在小鼠体内的的抗肿瘤免疫效应奠定了基础。ctp-foxm1抗原负载的dc疫苗治疗hepa1-6肝癌细胞荷瘤小鼠,小鼠肿瘤生长受到抑制,且与ctp、foxm1、pbs负载的dc疫苗对照组相比,皮下瘤体积和肿瘤重量均更小,差异具有统计学意义。ctp-foxm1组小鼠血清中细胞因子ifn-γ、il-2的表达量与其他组无统计学差异(p>0.5),he病理检查正常低表达foxm1的小肠未发现炎症以及组织损伤。原发性肝癌患者血清cxcl13表达水平明显高于健康人,并且与肿瘤大小、转移、tnm分期密切相关。

参考文献

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