人γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒的应用

背景^[1-3]

人γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒是一种专门用于定量检测人样本中IFN-γ浓度的实验工具。这种试剂盒基于酶联免疫吸附实验（ELISA）的原理，通过特定的抗体与样本中的IFN-γ结合，进而实现对其浓度的测定。

人γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒

使用人γ干扰素（IFN-γ）ELISA试剂盒的一般步骤如下：

1.试剂准备与样本处理：首先，需要将所有试剂和样本平衡至室温，并按照说明书的要求准备试剂，如洗涤液、标准品等。同时，根据样本类型（如血清、血浆、细胞培养上清液等），进行适当的预处理，如稀释或离心，以去除可能影响实验结果的杂质。

2.加样：按照说明书指示，在ELISA板的指定孔中加入标准品和样本。确保加样量准确，避免交叉污染。

3.孵育与抗体反应：将加样后的ELISA板放入恒温箱中，进行一定时间的孵育，使样本中的IFN-γ与固定在板上的抗体结合。随后，加入酶标记的抗体，与已结合的IFN-γ发生特异性反应。

4.洗涤：使用洗涤液去除未结合的抗体和杂质，确保只有特异性结合的抗体留在板上。

5.显色反应：加入底物溶液，酶催化底物产生有色产物。这一反应的强度与样本中IFN-γ的浓度成正比。

6.终止反应与读数：加入终止液，停止显色反应。随后，使用酶标仪在特定波长下读取各孔的光密度（OD）值。

7.数据分析：根据标准品的数据绘制标准曲线，并根据样本的OD值在标准曲线上查找对应的IFN-γ浓度。最后，结合实验目的和背景，对结果进行解释和分析。

应用^[4-5]

人γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒可以用于流行性乙型脑炎中医证型与人基因多态性、相关细胞因子研究

收集2011年和2012年重庆医科大学附属儿童医院的乙脑病例，采用人γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒双抗夹心ELISA法测定空白组、乙脑毒损脑络、毒陷心包组血中IL-10、TNF-α和IFN-γ的表达水平，观察其有无统计学差异,探讨（1）乙脑不同中医证型与IL-10、TNF-α和IFN-γ水平的关系；（2）IL-10、TNF-α和IFN-γ在乙脑的脑组织损伤过程中可能的作用机制；（3）探究乙脑不同阶段症状与细胞因子的关联性，揭示其本质与物质基础。为今后流行性乙型脑炎分型与治疗提供客观依据，为中医标准化进程提供新思路。

采集2011和2012年重庆医科大学附属儿童医院流行性乙型脑炎患者（乙脑）的标本，收集乙脑毒损脑络、毒陷心包证临床资料，采集与检测理化指标、筛选中医证候易感基因相关的试验标本。采用Taqman法测定基因分型，统计不同组别间的多态性，旨在找到IL-10启动子区域中的位置-592和IFN-γ启动子区域中的位置-1616与乙脑患者疾病易感性、分型和预后的关联性。

研究方法：全部84例患者均来源于2011年6月至2012年9月重庆医科大学附属儿童医院传染科住院部和门诊患儿。研究组包括毒损脑络组患者30例（男17，女13），平均年龄6.62±4.01岁；毒陷心包组患者30例（男18，女12），平均年龄5.16±2.79岁。对照组为同期于门诊体检的患者24例（男14，女10），平均年龄5.58±3.20岁。全部受检者于入院后或次日清晨空腹抽取肘静脉血4ml（用EDTA抗凝），在3000r/min的条件下离心后，分离出上层血清分装后置于-800C冰箱冷冻保存。用人γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒双抗体夹心ELISA法测定人外周血IL-10、TNF-α和IFN-γ的含量，人白介素10ELISA试剂盒、人肿瘤坏死因子αELISA试剂盒、人γ干扰素(IFN-γ)Elisa试剂盒由博士德提供。检测在武汉市第一医院生物实验室内按试剂说明完成。全部数据以±S表示，计数资料的比较采用卡方检验，计量资料的比较采t检验及方差分析。

研究结果①毒损脑络、毒陷心包组各与空白组血清中IL-10水平对比，毒损脑络、毒陷心包组血清中IL-10含量均明显高于空白组，二者比较具有显著差异(P<0.05)。毒陷心包组血清中IL-10含量明显高于毒损脑络组，二者有显著差异。

②毒损脑络、毒陷心包组与空白组血清中IFN-γ水平对比，毒损脑络、毒陷心包组血清中IFN-γ含量均明显高于空白组，二者比较具有显著差异(P<0.05)。毒陷心包组血清中IFN-γ含量明显高于毒损脑络组，二者有显著差异。

参考文献

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[5]李耘.流行性乙型脑炎中医证型与人基因多态性、相关细胞因子研究[D].湖北中医药大学,2014.